[发明专利]一种拟南芥基因突变体的鉴定方法在审
| 申请号： | 201810700980.4 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN108796053A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 舒凯;罗晓峰;代宇佳;陈锋;周文冠;尹晗;赵思华;帅海威;孟永杰;杨文钰 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种拟南芥基因突变体的鉴定方法，包括以下步骤：通过dCAPs Finder 2.0网站，设计含有限制性核酸内切酶酶切位点的引物；然后进行引物合成和PCR扩增，扩增出含有限制性核酸内切酶酶切位点的核酸片段；通过限制性核酸内切酶酶切，切出野生型、突变体两者大小不同的片段；通过核酸凝胶电泳，在琼脂糖凝胶中区分条带大小；利用核酸电泳成像系统分析样品基因为正常、突变或杂合情况。本发明可重复性高，工作耗时时仅为传统鉴定的30％及以下，每个样品鉴定成本降低了80％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 限制性核酸内切酶 突变体 拟南芥基因 酶切位点 琼脂糖凝胶 成像系统 分析样品 核酸电泳 核酸片段 可重复性 凝胶电泳 样品鉴定 引物合成 野生型 核酸 扩增 酶切 切出 条带 网站 引物 杂合 突变 耗时 | ||
【主权项】：
1.一种拟南芥基因突变体的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、通过已有的dCAPs Finder 2.0网站，对野生型拟南芥、基因突变体拟南芥的基因突变区段进行序列分析，分析两片段的差异部分，与限制性核酸内切酶酶切位点数据库进行比对，分析潜在的酶切位点，并提供推荐的片段引物及相应的限制性核酸内切酶；如没有直接对应的内切酶酶切位点，利用PCR的容错性，通过修改dCAPs Finder 2.0的相关参数，改变允许碱基错配数，分析产生相应的包含限制性核酸内切酶酶切位点的引物；步骤2、然后进行引物合成和PCR扩增，扩增出含有酶切位点的核酸片段；步骤3、通过特定的限制性核酸内切酶酶切，切出野生型、突变体两者大小不同的片段；步骤4、通过核酸凝胶电泳，在琼脂糖凝胶中区分条带大小；步骤5、利用核酸电泳成像系统查看每个样品的核酸条带的大小，分析样品基因为正常、突变或杂合情况。
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