[发明专利]一种基于xMAP技术的PCV2抗体检测方法

摘要

本发明公开了一种基于xMAP技术的PCV2抗体检测方法，包括重组抗原的制备；纯化目的蛋白；重组抗原包被；进行xMAP试验：计算阳性MFI值与阴性MFI值的比值，即P/N值；将P/N值大于等于3的结果定义为阳性。本发明的优点在于：PCV2微球与其他猪病原血清的MFI值差异明显，无交叉反应，能准确鉴别出PCV2抗体；检测限度低，灵敏度高，重复性好。

主权项

1.一种基于xMAP技术的PCV2抗体检测方法，其特征在于：包括如下步骤：(一)重组抗原的制备：首先培养阳性细菌及诱导其表达，然后超声破碎阳性菌，使菌体裂解并离心，把上清和沉淀分开，分别各取一定量上清和一定量沉淀溶解液于蛋白上样缓冲液中混匀，进行SDS‑PAG分析，根据目的蛋白条带大小确定目的蛋白即重组抗原的表达位置是沉淀中还是上清中；(二)进行纯化蛋白操作，得到蛋白样品PCV2 CAP蛋白；(三)重组抗原包被，把步骤(二)得到的蛋白样品PCV2 CAP蛋白，采用xMAP Antibody Coupling Kit试剂盒并按照其说明书进行包被，得到包被好的微球；(四)进行xMAP试验：待测血清样本进行2倍倍比稀释；稀释包被好的微球；对微球进行振荡、超声、重悬处理；向ELISA板中每孔加入微球和待测血清样本，振荡孵育ELISA板；ELISA板置于磁性分离器，分离微球，弃去反应液，洗涤，往ELISA板加入生物素标记的羊抗猪二抗；振荡孵育ELISA板，ELISA板置于磁性分离器，分离微球，弃去反应液，洗涤，往ELISA板加入SAPE，振荡孵育ELISA板，ELISA板置于磁性分离器，分离微球，弃去反应液，洗涤，利用luminex系统上机读取荧光中值；(五)计算阳性MFI值与阴性MFI值的比值，即P/N值；将P/N值大于等于3的结果定义为阳性，当待测血清不同稀释度与MFI值呈线性关系，且最大阳性参考品的P/N值大于5，说明包被有效。