[发明专利]一种磁固定床快速固定化细胞的方法

摘要

本发明公开了一种磁固定床快速固定化细胞的方法，具有过程简单、耗能小、耗时短、设备简单、可连续操作、对固定化的细胞活性影响较小、方便装载和卸载细胞等一系列优点，在生物催化等领域有着广泛的应用前景。

主权项

1.一种磁固定床快速固定化细胞的方法，其特征在于：包括：1)制备超顺磁流体：将二价铁离子与三价铁离子按摩尔比1:1.5～2.5的比例混合，加热到70～90℃，每升反应液加入110～130mL浓氨水，继续搅拌0.5～2h，反应完成后磁分离，去除上清液，得超顺磁流体；2)制备超顺磁导磁介质：取内径0.1～0.3mm、壁厚0.05～0.2mm、长度200～500mm的空心毛细玻璃管，在管内将步骤1)制备好的超顺磁流体填入，移去超顺磁流体中的分散液，在空心毛细玻璃管中完全填满超顺磁颗粒，干燥后封闭空心毛细玻璃管两端端口，形成封闭在玻璃毛细管中的超顺磁导磁介质；3)制备磁固定床反应器：在直径10～50mm，长度200～500mm的有机玻璃管中填充数根步骤2)制备的封闭在玻璃毛细管中的超顺磁导磁介质，直至有机玻璃管内被玻璃毛细管填满；在有机玻璃管外缠绕1～10层铜丝，每层500～1000匝铜丝，铜丝直径100～500μm，组成螺线管，得到磁固定床反应器；4)制备与细胞相互作用的磁流体：将二价铁离子与三价铁离子按摩尔比1:1.5～2.5的比例混合，加热到70～90℃，每升反应液加入110～130mL浓氨水，反应8～12min后，每升反应体系逐滴加入10～50mL浓度为4～6M的多元酸或其盐；继续在65～75℃的温度下搅拌0.2～2h，反应完成后磁分离，去除上清液，每升反应液剩余部分重新分散于90～110mL水中，得到与细胞相互作用的表面带负电的磁流体；5)取细胞浓度为108～1010的细胞悬浮液0.2～2L，加入步骤4)制备的与细胞相互作用的磁流体5～20mL，调节pH为3～5或调节盐浓度为0.2～0.8mol/L，搅拌混合后得到细胞磁流体混合液；调节磁固定床反应器螺线管电流0.5～2A，将细胞磁流体混合液以5～20mL/min的流速通入磁固定床反应器，细胞在磁流体的协助下吸附于磁固定床反应器内的封闭在玻璃毛细管中的超顺磁导磁介质表面，得到固定在磁固定床反应器的床层中的固定化细胞。