[发明专利]一种高质量可放大型鱼胶原蛋白提取纯化方法

摘要

本发明公开了一种高质量可放大型鱼胶原蛋白提取纯化方法，属于鱼胶原蛋白提取纯化技术领域。该方法是将冻干鱼皮剪碎后加入氢氧化钠溶液和过氧化氢溶液的混合溶液，搅拌后离心；向沉淀中加入异丙醇溶液，搅拌后离心；向沉淀中加入盐酸胍溶液，搅拌离心；向沉淀中加入乙酸溶液，再加入胃蛋白酶，搅拌后离心；向上清液中边搅拌边滴加入氯化钠‑乙酸母液，搅拌后离心；向沉淀中加入乙酸溶液溶解沉淀后透析；透析后将透析袋内的沉淀溶解于乙酸溶液中，加到正压过滤设备，用微孔滤膜过滤上清得蛋白溶液；先用乙酸溶液透析，再用水透析，得到胶原凝胶，冻干后即得胶原蛋白。获得的蛋白产物结构完整，生物活性保持完好，可直接用于医用及组织工程材料。

主权项

1.一种鱼胶原蛋白提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将冻干鱼皮剪碎后加入氢氧化钠溶液和过氧化氢溶液的混合溶液，搅拌24h‑48h，搅拌完成后离心或40目滤布过滤，得到沉淀；2)向步骤1)得到的沉淀中加入异丙醇溶液，搅拌24h‑48h，搅拌完成后离心或40目滤布过滤，得到沉淀；3)向步骤2)得到的沉淀中加入盐酸胍溶液，搅拌6h‑16h，搅拌完成后离心或40目滤布过滤，得到沉淀；4)向步骤3)得到的沉淀中加入乙酸溶液，再加入胃蛋白酶，搅拌24h‑72h，搅拌完成后或40目滤布过滤保留上清液；5)向步骤4)获得的上清液中边搅拌边滴加入氯化钠‑乙酸母液至氯化钠的终浓度为0.6M‑2M，继续搅拌12h‑36h后离心，去除上清液得到沉淀；其中：氯化钠‑乙酸母液是通过将氯化钠溶解于乙酸中制备的；6)向步骤5)获得的沉淀中加入乙酸溶液溶解沉淀，然后进行透析，透析过程中使用磷酸氢二钠溶液作为透析液；7)透析完成后将透析袋内的沉淀或胶体溶解于乙酸溶液中，然后加入到过滤设备中，并且利用微孔滤膜过滤上清，获得蛋白溶液；8)将步骤7)获得的蛋白溶液进行透析48h‑96h，透析过程中先使用乙酸溶液作为透析液，然后再使用水作为透析液，透析完成后得到的产物为胶原凝胶，冻干后即得胶原蛋白；上述步骤1至步骤8的全程温度控制在0～12℃下进行。