[发明专利]马铃薯黄矮病毒的联合基因检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了马铃薯黄矮病毒联合基因检测试剂盒及检测方法。本发明的试剂盒包括针对马铃薯黄矮病毒RdRp基因的1套特异性引物和荧光探针、针对马铃薯黄矮病毒NP基因的1套特异性引物和荧光探针、RT Buffer、随机引物、RNA酶抑制因子、dNTPs、反转录酶、TaqMan PCR mix、阳性对照样品和阴性对照样品。本发明还公开了联合基因实时荧光定量RT‑PCR检测马铃薯黄矮病毒的反应体系、反应条件和结果判定。通过实验证明，本发明的方法能够有效检测不同株系的马铃薯黄矮病毒，具有检测时间快、特异性强、灵敏度高、操作简便、安全和高通量的优点，非常适合进出境口岸检疫和农业生产上马铃薯黄矮病毒的快速检测。

主权项

1.用于检测或辅助检测马铃薯黄矮病毒的成套试剂，为如下(1)‑(3)中任一种：(1)由成套试剂甲和成套试剂乙组成；所述成套试剂甲由特异引物对甲和荧光探针甲组成；所述成套试剂乙由特异引物对乙和荧光探针乙组成；(2)所述成套试剂甲；(3)所述成套试剂乙；所述特异引物对甲由引物PYDV‑f1和引物PYDV‑r1组成；所述荧光探针甲为探针PYDV‑Probe1；所述特异引物对乙由引物PYDV‑f2和引物PYDV‑r2组成；所述荧光探针乙为探针PYDV‑Probe2；所述引物PYDV‑f1为如下a1)或a2)：a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；所述引物PYDV‑r1为如下a3)或a4)：a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；所述探针PYDV‑Probe1为如下a5)或a6)：a5)序列表中序列3所示的单链DNA分子；a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物PYDV‑f2为如下b1)或b2)：b1)序列表中序列4所示的单链DNA分子；b2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物PYDV‑r2为如下b3)或b4)：b3)序列表中序列5所示的单链DNA分子；b4)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的单链DNA分子；所述探针PYDV‑Probe2为如下b5)或b6)：b5)序列表中序列6所示的单链DNA分子；b6)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的单链DNA分子。