[发明专利]一种鉴定半滑舌鳎精液来源外泌体的ELISA方法

摘要

一种鉴定半滑舌鳎精液来源外泌体的ELISA方法，属于鱼类生物技术领域，特别是海水鱼精液外泌体检测应用领域。本发明开发了针对半滑舌鳎精液来源的外泌体鉴定的方法，用以解决半滑舌鳎精液中外泌体鉴定的问题。本发明利用抗HSP90特异性抗体建立并优化了一种直接法ELISA体系，通过检测外泌体标志蛋白HSP90，来间接体现外泌体的存在与否，其检测结果特异性强，且操作简便、快捷，且无需大型仪器设备及昂贵的化学试剂，具有应用推广价值。

主权项

1.一种半滑舌鳎精液来源的外泌体ELISA检测的方法，其特征在于所述方法步骤如下：(1)样品收集：半滑舌鳎收集精液样本，收集精液后分别混样，进行精浆外泌体分离；(2)对外泌体提取蛋白定量后，分装保存于‑80℃备用；(3)包被：按照100μL/孔将外泌体悬液加入酶标板孔中，孵育一定时间后移除悬液；(4)封闭：按照300μL/孔将封闭液加入酶标板孔中，孵育一定时间后移除封闭液并拍干；(5)检测：向每孔中加入100μL辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体，孵育一定时间后移除并拍干，随后洗涤，拍干，再加入100μL/孔底物进行显色反应；(6)终止：按照100μL/孔加入酸性终止液，终止反应；(7)读数：采用双波长法以酶标仪进行读数，得到OD值；所述双波长为450nm和630nm；(8)判定结果：P/N值≥2.1则判定为阳性；对OD值及浓度作图，得到标准曲线。