[发明专利]一种茶树脱毒组织培养方法

摘要

本发明公开了一种茶树脱毒组织培养方法，包括如下步骤：（1）选材：春季选取无腐无病害、当年生健壮枝条；（2）表面处理：将茶树芽外植体进行清洗、消毒；（3）消毒；（4）切割；（5）初代培养：接种至培养基Ⅰ上进行培养；（6）增殖继代：将无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖继代培养；（7）生根培养；（8）驯化炼苗。本发明的有益效果是：1.通过本方法进行的茶树组织培养，确定了组织培养中控制分化、继代生长、生根等的培养基成分，研究确定了生长调节物质的种类、浓度以及培养条件的最佳优化选择，攻克了茶树组织培养过程中的技术壁垒，解决了茶树离体再生困难、遗传转化效率低的技术难题，达到很好的培养效果。

主权项

1.一种茶树脱毒组织培养方法，包括：(1)选材：春季选取无腐无病害、当年生健壮枝条，枝条长度15~20cm，将枝条剪成带1个腋芽的健壮小段作为外植体；(2)表面处理：将收集好的外植体采用流水冲洗干净，用5%吐温‑80浸泡20min，采用流水冲洗干净；(3)消毒：根据外植体的老嫩程度，老的外植体的采用75%酒精消毒1~5min、0.1%HgCl溶液消毒10~20min，无菌水冲洗干净；嫩的外植体的采用75%酒精消毒1~5min、0.1%HgCl溶液消毒3~5min，无菌水冲洗干净；(4)切割：将消毒好的外植体切口进行更新处理，去掉大的苞叶；(5)初代培养：将处理好的外植体接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~28℃、每天光照10~16h、光照强度为5000~6000Lux、培养30~45d；(6)增殖继代：选取步骤（5）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~28℃、每天光照10~14h、光照强度为5000~7000Lux、培养25~35d；重复上述增殖过程；(7)生根：选取长势健壮的的茶树苗，将其接种至培养基Ⅲ中，放置于温度25~28℃、每天光照10~14h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养20~30d；(8)驯化炼苗：将步骤(7)得到的根系发达的茶树苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为20~28℃，湿度控制在85%~95%，7天后湿度递减至80%，此后逐步递减，15天后将茶树苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；其中：培养基Ⅰ为White改良培养基中添加1.0~3.0mg/LBA、0.5~1.5mg/LTDZ、0.01~0.2mg/LGA3、25~35g/L蔗糖和3~6g/L琼脂；培养基Ⅱ为White改良培养基中添加0.5~2.0mg/LBA、0.1~0.5mg/LGA3、0.1~1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和3~6g/L琼脂；培养基Ⅲ为White改良培养基中添加1.0~3.0mg/LNAA、0.1~1.0mg/LIBA、20~30g/L蔗糖和3~6g/L琼脂。