[发明专利]一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法

摘要

本发明公开了一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，首次从皱瘤海鞘中提取、分离和鉴别出化合物肌苷，能够对皱瘤海鞘进行充分回收利用，避免浪费；采用高速逆流色谱进行分离，具有样品无损失、无污染、高效、快速和分离量大的优点，具体分离步骤简单易操作；分离得到的肌苷在制药等领域具有广泛用途，对海洋天然产物有效成分的研究具有十分重要的意义。

主权项

1.一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：包括：1)取皱瘤海鞘，用正己醇浸提若干次，合并浸提液，浓缩得到粗提物；2)步骤1)得到的粗提物用高速逆流液相色谱分离：溶剂体系为乙酸乙酯：甲醇：水＝4.5～5.5:0.8～1.2:4.5～5.5，充分混合后静置分层，然后分离上相与下相；所述粗提物用45～55％甲醇溶解为浓度680～700mg/mL进样，以上相为固定相，以下相为流动相，流速2～4mL/min，正接正转，转速800～900r/min；温度34～36℃；检测波长：205～215nm；收集55～83min出峰对应的组份；3)取步骤2)中55～83min出峰对应的组份，用反相液相色谱分离：固定相：YMC‑Triart C18；流动相：甲醇‑水混合液；梯度洗脱1.5～2.5h，流动相中甲醇浓度从4～6％均匀递增到100％；流速55～65mL/min；柱温24～26℃；检测波长195～205nm、250～260nm、305～315nm；4)收集步骤3)中流动相中甲醇浓度为13％～25％时对应的组份，用反相液相色谱分离：固定相：YMC‑Triart C18；流动相：甲醇浓度为30～34％的甲醇‑水混合液；等度洗脱；流速55～65mL/min；柱温24～26℃；检测波长210～220nm、250～260nm、330～340nm；5)收集步骤4)中7～11min出峰对应的组份，用0.5～2％甲醇水配制成140～160mg/mL，用高效液相色谱分离：固定相：YMC‑Triart C18；流动相：甲醇浓度为0.5～2％的甲醇‑水混合液；等度洗脱；流速：8～12mL/min；柱温24～26℃；检测波长：195～205nm、245～255nm和255～265nm；收集66～75min出峰对应的组份，即为肌苷。