[发明专利]一种珠子参的组织培养与离体再生方法

摘要

本发明公开了一种珠子参的组织培养与离体再生方法，包括外植体的选择与消毒、愈伤组织的诱导、芽的分化诱导以及生根诱导等步骤。本发明对珠子参的组织培养及无性系的建立展开了探索，确立了无菌材料的获得、愈伤组织的诱导、愈伤的分化成芽、生根等理想培养条件，最终成功建立了珠子参组培苗的无性繁殖体系，为实现对珠子参野生资源的保护、栽培、对种苗的需求以及基因库的建立奠定了技术基础，解决野生珠子参产量低、供应少和自然栽培周期长的问题。

主权项

1.一种珠子参的组织培养与离体再生方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)外植体的选择与消毒：选择当年生根茎或者当年新发的幼苗茎段为外植体，用软毛刷在自来水下洗去泥土，再蘸取少量洗洁精刷洗1‑2min，自来水下冲洗1‑2h，然后置于超净工作台上用75％酒精(体积浓度)消毒8‑10s，无菌水冲洗2遍，再用0.1％升汞溶液消毒10‑15min，适当摇晃，使外植体与消毒液充分接触，最后倒掉升汞溶液，用无菌水冲洗6次，洗净备用；(2)愈伤组织的诱导：将消毒好的外植体在无菌操作下剪切并接种，当年生幼苗的茎段切成1.0‑1.5cm长，圆球形根茎切做两半，接种时平放，以切面接触培养基，两种外植体所接培养基相同，均为愈伤组织诱导培养基：MS+6‑BA 0‑2.0mg/L+2,4‑D 0‑2.0mg/L+NAA 0‑1.0mg/L+蔗糖25‑30g/L+琼脂4‑5g/L；培养条件：温度25±2℃，空气相对湿度50％‑60％，光照强度2000Lx，光照时间12小时/天；(3)芽的分化：将步骤(2)中诱导出的愈伤组织接种至分化培养基上，培养30‑40天后可分化出许多小芽，所述分化培养基为：1/2MS+TDZ 0.5‑2.0mg/L+NAA 0‑0.1mg/L+蔗糖25‑30g/L+琼脂4‑5g/L；培养条件：温度25±2℃，空气相对湿度50％‑60％，光照强度2000Lx，光照时间12小时/天；(4)生根培养：将步骤(3)中诱导出的珠子参小芽切下，接种至生根培养基中，生根培养基为：1/2MS+IBA 0.1‑2.0mg/L+NAA 0‑1.0mg/L+蔗糖25‑30g/L+琼脂4‑5g/L；培养条件：温度25±2℃，空气相对湿度50％‑60％，光照强度2000Lx，光照时间12小时/天。