[发明专利]一种血液循环肿瘤DNA提取新方法在审
| 申请号： | 201810765822.7 | 申请日： | 2018-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN108893525A | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 严勇攀;王丽丽;刘程捷 | 申请（专利权）人： | 武汉拜施普生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物科学技术领域，尤其是一种血液循环肿瘤DNA提取新方法，包括抽取血液样本、去除红细胞、裂解白细胞及消化蛋白、去除蛋白、DNA吸附提纯、DNA溶液收集，向待提取样本中加入红细胞裂解液，裂解待提取样本中的红细胞，离心分离，至红细胞完全裂解，取白色沉淀以去除红细胞，红细胞裂解液包含以下组分：3‑4mmol/L的氯化钠、10‑15g/L NH4Cl、12‑13mmol/L Tris‑HCl和0.02‑0.03mol/L的三羟甲基氨基甲烷；本发明能够快速提取血压中循环肿瘤DNA，成本低，设计巧妙，操作简单，安全环保，适合大规模推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 红细胞 去除 红细胞裂解液 血液循环 肿瘤DNA 裂解 样本 氯化钠 蛋白 三羟甲基氨基甲烷 科学技术领域 安全环保 快速提取 血液样本 循环肿瘤 提纯 抽取 血压 细胞 消化 | ||
【主权项】：
1.一种血液循环肿瘤DNA提取新方法，包括抽取血液样本、去除红细胞、裂解白细胞及消化蛋白、去除蛋白、DNA吸附提纯、DNA溶液收集，其特征在于：向待提取样本中加入红细胞裂解液，裂解待提取样本中的红细胞，离心分离，至红细胞完全裂解，取白色沉淀以去除红细胞，红细胞裂解液包含以下组分：3‑4mmol/L的氯化钠、10‑15g/L NH4Cl、12‑13mmol/L Tris‑HCl和0.02‑0.03mol/L的三羟甲基氨基甲烷；向白色沉淀中加入细胞裂解液，裂解白细胞及消化蛋白，温育反应体系，细胞裂解液包含以下组份：Proclin300 20‑30g/L、EDTA 0.6‑0.8g/L、SDS 20‑30g/L、NaCl 5‑10g/L、蛋白酶K 10g/L和尿素100‑150g/L；去除蛋白后加入3mol/L醋酸钠溶液至醋酸钠终浓度0.3mol/L，加入2倍体积‑20℃预冷的无水乙醇，4℃13000rpm离心5min；弃上清，加入2倍体积‑20℃预冷的70％乙醇洗涤沉淀，4℃13000rpm离心5min，弃上清，得到DNA。
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