[发明专利]一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法

摘要

本发明涉及生物细胞培养技术领域，具体涉及一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法，包含以下步骤：①绑定静脉输液针与气管、②快速注入消化液、③肺入离心管、④吸取消化液、⑤缓慢注入消化液、⑥消化液再利用、⑦循环操作。本发明循环利用初始添加的消化液，反复吸取并注入肺中进行消化，使注入肺中的消化液量基本等于渗出肺的消化液量，保证消化液始终充满肺泡，从而使得消化持续稳定且快速，使消化更充分，消化总时间大大缩短，有效的增加了消化液消化效率和利用率，避免了消化液的浪费，增加了Ⅱ型肺泡上皮细胞原代产量。

主权项

1.一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法，其特征在于，它包含以下步骤：①绑定静脉输液针与气管：将支气管及其上连接的两肺从大鼠体内解剖下来，冲洗残余血液，去除坏死的组织，置于大培养皿中，将静脉输液针针尖处1cm用镊子弄断，保留1‑1.5cm的针头，将静脉输液针针头插入肺的气管中，用止血钳将气管与针头固定，再用黑线绑定好静脉输液针和气管；②快速注入消化液：将15ml0.25%胰酶和15ml0.1%Ⅰ型胶原酶倒入50ml离心管中混合均匀得消化液，用注射器将上述消化液抽出20ml后，将注射器与静脉输液针的导管相连，推压注射器，通过静脉输液针将消化液快速打入肺中，使两侧肺迅速充盈，判断肺有无漏液现象；若无漏液现象，则继续将50ml离心管中余下的10ml消化液倒入大培养皿中；③肺入离心管：右手提起静脉输液针连接的肺组织放置于50ml离心管中,再把离心管放在管架上；④吸取消化液：将注射器与静脉输液针的导管脱开，左手食指、中指夹住导管，左手其他手指辅助将大培养皿倾斜，同时右手持注射器将大培养皿中的消化液吸取，大培养皿留大约2ml消化液以防细胞干死，注意最后注射器抽入少许空气，有助于将残留在导管中的消化液完全推入肺中；⑤缓慢注入消化液：将导管和注射器重新连接，左手持离心管，将装有肺的离心管置于35‑38℃的水浴锅中，右手持注射器缓慢推消化液，速度控制在3‑4min将消化液推完；⑥消化液再利用：推完消化液后，左手把离心管由水浴锅中拿出，右手用静脉输液针将肺提出离心管，之后左手将离心管中从肺泡中渗出的消化液倒入大培养皿中；⑦循环操作：重复步骤③至⑥的操作2‑4次；消化总时间控制在12‑17min，之后加终止液，停止消化过程。