[发明专利]一种拉莫三嗪单克隆抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201810775489.8 | 申请日： | 2018-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN108840933A | 公开（公告）日： | 2018-11-20 |
| 发明（设计）人： | 夏泉;任刘丽;赵营莉;宗凯;高贝贝;余晓峰 | 申请（专利权）人： | 夏泉 |
| 主分类号： | C07K16/44 | 分类号： | C07K16/44;C12N5/20 |
| 代理公司： | 苏州翔远专利代理事务所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王华 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 一种拉莫三嗪单克隆抗体的制备方法，经过多次重复免疫、细胞融合、拉莫三嗪单克隆抗体纯化等步骤制得拉莫三嗪单克隆抗体，为以后的拉莫三嗪药物浓度检测提供原材料。 | ||
| 搜索关键词： | 拉莫三嗪 单克隆抗体 制备 多次重复 浓度检测 细胞融合 | ||
【主权项】：
1.一种拉莫三嗪单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：第一步：将拉莫三嗪‑牛血清蛋白偶联物作为免疫原注射入Balb/c小鼠体内，所用免疫原用量为40‑80ug/只，每隔7~15天免疫一次，使Balb/c小鼠产生抗血清；第二步：取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按5~7:1的数量比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，用聚乙二醇水溶液作为融合剂将两种细胞融合得到融合细胞，然后将融合细胞接种于Balb/c小鼠腹腔渗出细胞作滋养层的细胞培养板中，再将细胞培养板置于CO2培养箱中进行培养；待融合细胞开始形成集落后进行第一次 ELISA 筛选，以筛选到仅与拉莫三嗪‑牛血清蛋白偶联物阳性反应，与BSA、OVA不反应的孔进行亚克隆；亚克隆6~8天后再进行单克隆孔的 ELISA 筛选，重复亚克隆 2~3 次，得到稳定分泌单抗的杂交瘤细胞；第三步：向6~7周龄的Balb/c小鼠腹腔注入灭菌石蜡油，注射量为0 .5 mL/只，7天后腹腔注射所述杂交瘤细胞5×105个/只，7天后采集腹水，离心后吸出上清液，然后用辛酸‑饱和硫酸铵法进行纯化，得到拉莫三嗪单克隆抗体溶液。
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