[发明专利]一种离体诱导平陆百合多倍体的方法

摘要

本发明涉及一种离体诱导平陆百合多倍体的方法，包括百合鳞茎的预培养、诱导培养基的配制、诱导多倍体、培养诱导后鳞茎、诱导鳞茎生根、倍性鉴定，本发明方法以平陆食用百合脱毒试管鳞茎为材料，经诱导剂二甲戊灵或氟乐灵诱导处理，获得四倍体百合。本发明经过染色体加倍的多倍体百合具有植株鳞片肥厚、健壮、高产优质等特点，本发明方法利用诱导剂二甲戊灵或氟乐灵，获得了四倍体百合，提高了百合的质量和产量，进一步提高了其营养价值和经济效益。

主权项

1.一种离体诱导平陆百合多倍体的方法，其特征在于包括以下步骤：1)、百合鳞茎的预培养：以平陆百合试管鳞茎为外植体，接种于MS＋0.8mg·L‑1 6‑BA＋0.1mg·L‑1 NAA＋30g·L‑1蔗糖＋6g·L‑1琼脂的培养基中预培养40d；2)、诱导培养基的配制：在培养基MS＋0.8mg·L‑1 6‑BA＋0.1mg·L‑1 NAA＋30g·L‑1蔗糖＋6g·L‑1琼脂中添加诱导剂至浓度为200μmo·L‑1，高压灭菌备用，所述诱导剂为二甲戊灵或氟乐灵；3)、诱导多倍体：将步骤1)所述预培养后的鳞茎剥去外面一层鳞片后接种于步骤2)所述培养基中进行诱导处理21d，得到诱导后的鳞茎；4）培养诱导后鳞茎将步骤3)所述诱导后的鳞茎剥去外面一层鳞片接种于MS + 0.2～1 mg/L 6‑BA + 0.1～0.5mg/L NAA + 60～100 g·L‑1蔗糖培养基中，诱导鳞茎生长得到再生植株；5)、诱导鳞茎生根：将步骤4）培养获得的百合鳞茎接种于1/2MS＋0.8mg·L‑1 NAA＋90g·L‑1蔗糖＋6g·L‑1琼脂+400mg·L‑1纳米碳培养基中进行生根培养，诱导鳞茎生根；6)、倍性鉴定：取步骤5）的生根根尖约2mm，经饱和对二氯苯预处理2‑3h，于4℃卡诺氏固定液固定24h，清水洗净，1mol·L‑1盐酸60℃下解离18‑25min，清水洗净，用卡宝品红染色10‑15min后压片、镜检，得到完整的百合四倍体，所述固定液为无水乙醇∶冰醋酸按3:1的比例配制而成。