[发明专利]同时定量蛋白质丰度与半胱氨酸氧化水平的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种同时定量蛋白质丰度与半胱氨酸氧化水平的方法，利用iTRAQ试剂和iodoTMT试剂的质量报告基团分子量不同和结合多肽位置不同的特征，应用iodoTMT试剂标记蛋白质半胱氨酸，同时应用iTRAQ试剂标记多肽氨基末端，实现同时检测半胱氨酸氧化还原水平和蛋白质表达丰度的变化，从而可准确判断蛋白质氧化还原水平的变化。本发明在另一方面还公开了上述方法在同时定量分析细胞、组织及体液等样品中蛋白质丰度与半胱氨酸氧化还原水平中的应用。

主权项

1.一种同时定量蛋白质丰度与半胱氨酸氧化水平的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1、采用烷基化试剂封闭蛋白质上游离的巯基；步骤2、采用还原剂对已被可逆氧化修饰的半胱氨酸进行还原；步骤3、对还原后的蛋白质进行脱盐处理；步骤4、采用iodoTMT标签标记经脱盐处理后的所述蛋白质；步骤5、电泳分离步骤4中得到的所述蛋白质，并进行消化处理；步骤6、采用脱盐柱对步骤5中消化得到的多肽样品进行脱盐处理；步骤7、采用iTRAQ标签标记所述多肽样品；步骤8、采用所述脱盐柱对所述iTRAQ标签标记后的多肽样品进行脱盐处理；步骤9：采用超高效液相色谱分离步骤8中脱盐处理后的所述多肽样品；步骤10、采用高分辨质谱仪鉴定各分级多肽样品；步骤11、搜索相应的蛋白质数据库，并对搜库结果进行分析。