[发明专利]一种PRRSV的双标记型病毒样颗粒(VLPs)的制备

摘要

本发明公开了一种PRRSV的双标记型病毒样颗粒(VLPs)的制备及鉴定方法，涉及生物研究技术领域，制备含有GP5、M和N蛋白编码基因ORF5、ORF6和ORF7的pMD18T重组质粒，为扩增模板，ORF5末端引入Myc标签，ORF6末端引入His标签，重组至双元载体的PpH和Pp10启动子下，获得重组质粒，转入DH10Bac大肠杆菌获得重组杆粒；ORF7与pFastBacHTB载体重组获得重组杆粒。将两种重组杆粒接种SF9细胞，Myc‑GP5、His‑M和His‑N蛋白被成功表达，自动组装成VLPs。为研究GP5、M和N主要结构蛋白功能和开发能够区分感染和免疫的VLPs疫苗奠定了基础。

主权项

1.一种PRRSV的双标记型病毒样颗粒(VLPs)的制备，其特征在于：所述的PRRSV的双标记型病毒样颗粒的制备步骤为：制备含有ORF5、ORF6和ORF7基因的pMD18T重组质粒，以此为扩增模板，在ORF5末端引入Myc标签，在ORF6末端引入His标签，分别重组至pFastBacdual双元载体的PpH和Pp10启动子下，获得了重组质粒，转入DH10Bac大肠杆菌中，通过转座获得了相应的整合到昆虫杆状病毒基因组上的pFastBacdual‑Myc‑GP5‑His‑M重组杆粒；将ORF7重组至含有6xHis标签的pFastBacHTB载体，获得相应的pFastBac HTB‑N重组杆粒，将纯化的两种重组杆粒分别转染SF9昆虫细胞，将两种SF9细胞的P3代种毒按MOI值3:3的比例接种Highfive细胞，检测表明Myc‑GP5、His‑M和His‑N蛋白被成功表达；透射电镜结果表明，Myc‑GP5和His‑M能够自动组装成VLP，以VLPs作为包被抗原进行间接ELISA检测，结果显示标记型VLPs与PRRSV阳性猪血清具有良好的反应性。