[发明专利]人胎盘绒毛组织的制备冻存方法和应用

摘要

本发明公开了一种人胎盘绒毛组织的制备冻存方法，包括：(1)将胎盘洗净；沿胎盘边缘剪下已脱落的蜕膜，除去羊膜；(2)将上述已去除羊膜的胎盘胎儿面绒毛膜及大血管一起分离，剩余的胎盘组织即为胎盘绒毛组织，将胎盘绒毛组织剪成小块，再切成薄片；将薄片放入冻存袋或冻存管中，以三步法导入玻璃化冻存液，转入程序降温仪，降温至‑80℃～‑90℃，转移至液氮冷冻保存。本发明的冷冻保存方法有利于提高冻存组织和细胞的活性，复苏后形态、功能、结构与新鲜组织一致，组织内细胞总体存活率达90％以上，所保存的组织不但可以用于分离干细胞，上皮细胞等领域，还可以用于组织工程移植等领域。

主权项

1.一种人胎盘绒毛组织的制备冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将胎盘洗净；沿胎盘边缘剪下已脱落的蜕膜，除去羊膜；(2)将上述已去除羊膜的胎盘胎儿面绒毛膜及大血管一起分离，剩余的胎盘组织即为胎盘绒毛组织，将胎盘绒毛组织剪成小块，再切成薄片；将上述薄片放入冻存袋或冻存管中，以三步法导入玻璃化冻存液，转入程序降温仪，按照设定的降温程序降温至‑80℃～‑90℃，转移至液氮冷冻保存；所述降温程序为：在4℃保持2～5min；再以1℃/min速率降低至0℃，保持5～10min；之后在5～10min内降温至‑10℃；40～60min内降温至‑40℃，之后再以40℃～60℃/min的速率迅速降温至‑80℃～‑90℃，降低至目的温度后迅速转移至液氮中；所述玻璃化冻存液，由质量浓度为20％的人血白蛋白溶液、二甲基亚砜、丙二醇、羟乙基脲和海藻糖组成，其中，各组分所占比例为：二甲基亚砜15～22wt％，丙二醇10～18wt％，羟乙基脲10～16wt％，海藻糖8～15wt％，余量为人血白蛋白溶液。