[发明专利]三维蜜胺海绵络合Fe3+

摘要

本发明涉及一种三维蜜胺海绵络合Fe3+用于酶的固定的方法。本方法以廉价的市售的蜜胺海绵作为载体，通过海绵上固有的伯胺与直接与Fe3+络合从而固定酶。这种新型酶载体优点在于它安全简单快速并且无污染，将酶进行固定后，酶活性和稳定性大大提高，海绵具有弹性，镊子挤压就能分离和实现重复使用。固定化酶应用于染料行业降解去除染料废水的脱色，是一种环境友好型的高效催化剂，并且，在复杂生物样品的前处理和医学领域有着广泛的应用于前景。

主权项

1.一种三维蜜胺海绵络合Fe3+用于酶的固定的方法，其步骤是：材料（MS@Fe3+）的制备购买的蜜胺海绵不经过任何处理，直接用打孔器打出孔径为d=1.2cm，厚度h=1cm的圆柱状，保证海绵的的质量为10mg，将称好的海绵放到的FeCl3溶液中浸泡10min后，用镊子取出来挤压数次，用滤纸将海绵中的水吸干，在60℃真空干燥箱里干燥12h，就得到了络合了Fe3+的材料（MS@Fe3+）；酶的固定纯化酶，称取漆酶溶于水中，在4℃下，在转速为12000 rpm冷冻离心机离心15 min，取上清液冻干，放在4℃备用；称取纯化的漆酶溶于20ml、 pH=2‑9,50 mM、50 mM的磷酸的缓冲液中，取缓冲液20ml，加入步骤a得到了络合材料（MS@Fe3+），并在摇床中25℃下过夜，酶的上载量通过Beford法检测为每毫克固体颗粒能够固定180微克的漆酶，镊子挤压回收该固定化酶，并用pH=4，50 mM磷酸的缓冲液洗涤材料数次,以除去材料上物理吸附的酶和溶液中未固定的游离酶。