[发明专利]一种胃癌靶向重组免疫毒素的快速纯化方法在审
| 申请号： | 201810794778.2 | 申请日： | 2018-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN109021113A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 柳增善;李萌;王海波;胡盼;任洪林;卢士英;张嵩;马学东 | 申请（专利权）人： | 上海杵焱健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 魏征骥 |
| 地址： | 201602 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种胃癌靶向重组免疫毒素的快速纯化方法，属于生物工程领域。利用已构建并筛选的可高效表达可溶性rG17PE38KDEL的重组大肠菌株，优化大体积培养条件，扩大培养诱导体积至1L，1％接种量接种于LB培养基中，37℃摇培2h后加入0.5mM诱导剂IPTG，180rpm/min 16℃摇培16h，所表达蛋白65％以上为可溶状态；通过超声破碎法获得可溶性蛋白后，通过三步层析方法得到较高纯度与活性的重组毒素rG17PE38KDEL，获得可用于药物评价的具有良好活性的高纯度毒素，纯化过程后得到的胃癌靶向重组免疫毒素rG17PE38KDEL的纯度可达95％以上，纯化后重组毒素rG17PE38KDEL可以与肿瘤细胞表面CCK2R结合，并杀伤该类靶向肿瘤细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 重组免疫毒素 毒素 靶向 胃癌 高纯度 生物工程领域 肿瘤细胞表面 超声破碎法 可溶性蛋白 靶向肿瘤 表达蛋白 大肠菌株 高效表达 扩大培养 培养条件 药物评价 接种量 诱导剂 杀伤 层析 构建 可溶 可用 接种 诱导 筛选 细胞 优化 | ||
【主权项】：
1.一种胃癌靶向重组免疫毒素的快速纯化方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)取IPTG诱导后重组菌体，300W，30min超声破碎，离心取上清并加入终饱和度为40％的硫酸铵，充分混匀后离心收集沉淀；(2)使用上样缓冲液重悬步骤(1)中的蛋白沉淀，并在相同缓冲液中透析3h；(3)取透析后蛋白溶液经![]()
蛋白纯化系统，上样到离子交换层析介质(Q Sepharose Fast Flow)，后通过该纯化系统以0‑1mol/L氯化钠缓冲液浓度梯度洗脱，收集0.2‑0.9mol/L氯化钠浓度下洗脱的蛋白溶液；(4)将收集的蛋白溶液再次经![]()
蛋白纯化系统，上样到分子排阻层析介质(G‑25)除盐，其缓冲体系被置换为保存液，收集所有蛋白溶液；(5)通过Milipore 10KD超滤管，低温离心上述收集蛋白溶液，收集滤液。
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