[发明专利]一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于新型纳米材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用，具体是采用二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料作为模拟酶来标记二抗，以三角形金纳米片作为基底材料来构建出一种夹心型免疫传感器，实现对前列腺特异性抗原的快速、灵敏检测。

主权项

1.一种夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法，所述制备的方法包括：/n（1）制备三角形金纳米片；/n（2）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料；/n（3）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物；/n（4）制备夹心型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的工作电极；/n所述步骤（1）制备三角形金纳米片包括：/n①制备金种子溶液/n将25.0 µL ~ 30.0 µL、50.0 mmol/L氯金酸溶液加入到4.0 ~ 5.0 mL、0.1 mol/L十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后将200.0 ~ 300.0 µL、10.0 mmol/L硼氢化钠在持续搅拌下滴加到上述溶液中，在室温的条件下反应2 h，得到金种子溶液；/n②制备三角形金纳米片/n首先分别配制a、b两种溶液：a溶液为将40.0 µL、50.0 mmol/L氯金酸溶液和15.0 µL、10.0 mmol/L的碘化钠溶液加入到8.0 mL、0.1 mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；b溶液为将500.0 µL、50.0 mmol/L氯金酸溶液和300.0 µL、10.0 mmol/L的碘化钠溶液加入到40.0 mL、0.1 mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液中；分别将40.0 ~ 60.0 µL和400.0 ~600.0 µL、0.1 mol/L抗坏血酸溶液加入到a、b溶液中，然后将100.0 µL ~ 200.0 µL稀释10倍的金种子溶液加入到a溶液中反应1 s后，迅速将3.0 ~ 4.0 mL的a溶液加入到b溶液搅拌十几秒，然后在室温条件下静置1 ~ 3 h，最终离心、清洗3次，得到三角形金纳米片；/n所述步骤（2）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料包括：/n①制备中空核壳金银铂纳米立方体/n将10.0 µL、25.0 mmol/L的氯金酸加入到10.0 mL、75.0 mmol/L十六烷基三甲基氯化铵溶液中，然后滴加0.6 mL、10.0 mmol/L硼氢化钠溶液，室温条件下反应2 h，得到金种子溶液；然后将0.1 ~ 0.3 mL、10.0 mmol/L氯金酸溶液和2.0 ~ 4.0 mL、0.2 mol/L十六烷基三甲基氯化铵溶液加入到25.0 mL去离子水中，将1.5 ~ 2.5 mL、0.1 mol/L抗坏血酸加入到上述溶液反应十几秒，然后加入0.3 ~ 0.5 mL稀释100倍的金种子溶液，室温静置8 h之后，将0.5 ~ 1.0 mL、10.0 mmol/L硝酸银和2.0 ~ 4.0 mL、0.1 mol/L抗坏血酸溶液加入到上述溶液，放在50 ℃水浴锅中静置12 h，得到金银纳米立方体胶体溶液；取4.0 ~ 6.0 mL金银纳米立方体胶体溶液，在油浴锅中持续搅拌回流加热到100 ℃，15 min后将200.0 ~400.0 µL、5.0 mmol/L氯铂酸溶液滴加到溶液中，持续搅拌反应15 min，冷却、离心、清洗3次，得到中空核壳金银铂纳米立方体；/n②制备二硫化钼纳米花/n将1.2 ~ 1.6 g钼酸铵加入到15.0 mL去离子水中，然后将0.8 ~ 1.0 g乙二胺加入上述溶液中，超声溶解之后，加入适量1.0 mol/L的盐酸调节pH到4.0 ~ 6.0，在50 ℃条件下反应2 h,离心清洗3次，在50 ℃环境下真空干燥，得到钼酸铵和乙二胺的配合物；取0.1 ~0.2 g钼酸铵和乙二胺的配合物加入到15.0 mL去离子水中，然后加入0.2 ~ 0.4 gL-半胱氨酸，超声分散，放入25.0 mL聚四氟乙烯内衬的高压反应釜，加热到200 ℃，保温14 h，最终离心清洗3次，真空干燥得到二硫化钼纳米花；/n③制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料/n将0.1 ~ 0.2 g二硫化钼纳米花超声分散到20.0 mL无水乙醇中，在油浴锅中回流加热到100 ℃，然后加入20.0 ~ 30.0 µL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,反应2 h之后，冷却，离心，清洗3次，冷冻干燥得到氨基化的二硫化钼纳米花；将2.0 ~ 4.0 mL、2.0 mg/mL中空核壳金银铂纳米立方体加入到2.0 mL、2.0 mg/mL的氨基化的二硫化钼纳米花，超声分散1 h,在室温环境下，震荡6 h，离心清洗2次，得到二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料；/n所述步骤（3）制备二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料孵化前列腺特异性抗体的二抗标记物/n将2.0 ~ 4.0 mL、10.0 µg/mL前列腺特异性抗体加入到2.0 mL、2.0 mg/mL二硫化钼纳米花负载中空核壳金银铂纳米立方体的纳米复合材料中，在4 ℃环境下震荡12 h，离心清洗分散在磷酸盐缓冲溶液中。/n