[发明专利]一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法

摘要

本发明公开了一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，将EpoD分子印迹聚合物用少量纯甲醇浸泡，装入分离柱内，依次使用甲醇‑醋酸、甲醇、甲醇‑去离子水淋洗柱子，抽真空压实柱子；取EpoD粗品溶于20‑80%甲醇水溶液，加入到装好的柱子内；静置20‑50min后，淋洗柱子，去除干扰物，进一步减少杂质干扰；使用10‑90%的甲醇PBS溶液作为洗脱液洗脱柱子，使得EpoD完全溶解于洗脱液内，收集洗脱液并旋转蒸干，纯甲醇复溶，得到纯化的EpoD甲醇溶液。相对于已有的分离纯化方法，其操作简单、方便，成本低，同时在埃博霉素D吸附过程中为特异性吸附，能达到更好的分离效果。为进一步的埃博霉素D分离纯化提供可能性。

主权项

1.一种基于分子印迹分离纯化埃博霉素D的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）埃博霉素D分子印迹聚合物的制备：取0.1mmol模板分子，0.1‑1.0mmol功能单体，0.5‑3.0mmol交联剂混合后，加入50mL致孔剂静止1‑2h，加入30mg引发剂，超声振荡20min后，立即通入氮气10‑20min ；然后在40‑55℃下聚合反应10‑24 h，再在55‑65℃下聚合反应10‑24h ；聚合反应完成后将反应产物破碎、研磨、过筛后得到粒径为40‑60μm的聚合反应物，再用200mL乙酸/甲醇混合液连续冲洗数次后，纯甲醇洗涤数次，真空干燥得埃博霉素分子印迹聚合物；2）分子印迹聚合物分离柱装填：将EpoD分子印迹聚合物用少量纯甲醇浸泡，装入底部加滤膜的分离柱内，依次使用甲醇‑醋酸、甲醇、甲醇‑去离子水淋洗柱子，抽真空压实柱子；3）上样：将EpoD粗品溶于 20‑80%甲醇水溶液，加入到装好的柱子内；4）吸附、淋洗：静置20‑50min后，使用去离子水、甲醇、乙腈、乙酸或其混合物淋洗柱子，去除干扰物，进一步减少杂质干扰；5）洗脱：使用10‑90%的甲醇PBS溶液（甲醇和PBS按一定体积混合）作为洗脱液洗脱柱子，使得EpoD完全溶解于洗脱液内，收集洗脱液并旋转蒸干，纯甲醇复溶，得到纯化的EpoD甲醇溶液。