[发明专利]一种超声-双氧水结合大孔树脂的青钱柳多糖的脱色方法

摘要

本发明公开了一种超声‑双氧水结合大孔树脂的青钱柳多糖的脱色方法，包括原料预处理、乙醇除杂、弱碱水提、粗多糖酶解、青钱柳多糖浓缩液超声‑双氧水脱色、AKTA‑大孔树脂层析系统脱色、透析、离心、多糖的获得这9个步骤，操作简便，本发明操作条件温和，脱色期较短，多糖得率较高，综合成本较低的青钱柳多糖的脱色。

主权项

1.一种超声‑双氧水结合大孔树脂的青钱柳多糖的脱色方法，其特征在于：具体包括以下步骤：(1)原料预处理：净选青钱柳，清除杂草、腐叶，将原料青钱柳粉碎至10～40目待用；(2)乙醇除杂：第一次加入6～8倍青钱柳重量的75％的乙醇先浸泡12～24h，第二次用4～5倍量70％乙醇浸泡6～12h，将青钱柳放入通风橱待乙醇挥发完全后，再移至40℃烘箱烘干，得到脱脂青钱柳粉末；(3)弱碱水提：将上述挥干乙醇的青钱柳用浓度为0.5～2.0％的碳酸钠水溶液、控制料液比为1:20～1:10，80～95℃下提取，提取时间2～4h，浸提后稍微冷却，趁热用纱布过滤，滤液离心，收集滤液，滤渣反复提取两次，合并滤液，将提取液用旋转蒸发仪旋蒸真空浓缩，减压低温至原滤液的1/3体积后，于4℃保存备用；(4)粗多糖酶解：将步骤(3)中得到的浓缩滤液，加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量为粗多糖水溶液的3‑5w/w％，于35～45℃反应30～60min，酶解后将酶解液置于沸水灭酶5min，将灭酶后的酶解液进行离心控制离心转速为4800rpm，时间5min，取上清液，备用；(5)青钱柳多糖上清液超声‑双氧水脱色：将步骤(4)中所得的青钱柳多糖上清液在中加入浓度为30％的双氧水，用氨水调节pH 8～10，混匀，所述的双氧水占凉粉草多糖上清液体积比的2～5％(v/v)，其中超声功率：120～300W，超声时间0.5～1h，温度35～50℃，同时搅拌，双氧水脱色机理为：H2O2+·OH→H2O+·HO2·HO2+·OH→H2O+O2·OH+·OH→H2O2；(6)AKTA‑大孔树脂层析系统脱色：将所述上清液通过AKTA‑AB‑8大孔吸附树脂层析系统进行脱色，其取经预处理的AB‑8大孔树脂于250mL三角瓶中，装入内径为50mm的层析柱，高度为600mm，上样量为18‑20mL，流速为1‑1.5mL/min；以示差检测器在线检测多糖，紫外检测器在线辅助检测蛋白质等；根据在线检测情况收集多糖组分；多糖组分富集、在50℃～60℃下减压浓缩至一定体积；(7)透析：使用透析袋，所述透析袋截留分子量为9000，将AKTA‑大孔树脂层析系统脱色后收集的多糖进行透析处理，然后通过旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3～1/4；(8)离心：控制离心转速为4500rpm，离心10min，在浓缩液中加入无水乙醇，丙酮，静置、离心，收集沉淀；(9)多糖的获得：沉淀用蒸馏水在超声波清洗器中超声辅助溶解后，进行透析，所述透析袋截留分子量14000、减压浓缩、冷冻干燥处理，即得到脱色的多糖。