[发明专利]一种利用新生侧芽高效获得杂交兰无菌材料的方法

摘要

本发明公开了一种利用新生侧芽高效获得杂交兰无菌材料的方法，该方法涉及植物组织培养领域。本发明创建了一种提高杂交兰新芽中的小侧芽成活率的方法，通过灭菌剂的联合使用，降低无菌消毒过程中的污染率，提高小侧芽的获得率，为杂交兰育种中特异单株的种苗扩繁奠定基础。本发明以杂交兰新芽产生的小侧芽为外植体来获得无菌材料，不仅能够降低污染率，还能提高成活率，对于杂交兰特异单株的种苗扩繁具有重要意义。

主权项

1.一种利用新生侧芽高效获得杂交兰无菌材料的方法，其特征在于：具体的实施步骤为：1)前处理：取材前1周，杂交兰植株用800倍多菌灵溶液灌根处理2次，间隔3天，并保证外植体取材时植株干燥；2)取样：从健壮母株上选取长势健康的新生芽，去除杂质和污物，带回实验室；3)表面清洁：剥去老叶，刮除根基部污物，用蘸有洗洁精的软毛刷刷洗外植体表面，冲洗后浸入75％酒精中数秒，浸入浓肥皂水中，震荡清洗1小时，流水冲洗1小时；4)无菌消毒：用吸水纸吸干外植体的表面的水分，转移至超净工作台进行灭菌处理，采用酒精、升汞、次氯酸钠等消毒剂联合灭菌；5)接种：将剥离的小侧芽和茎尖分别接种于原球茎诱导培养基：1/2MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6‑BA+100ml/L椰汁+30g/L蔗糖+5g/L琼脂+1g/L活性炭，50mL三角瓶每瓶接种1个外植体。