[发明专利]一种重组大肠杆菌生产磷脂酶D的方法有效
| 申请号： | 201810843255.2 | 申请日： | 2018-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN109136207B | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 卢英华;熊维德;曾宪海;姚传义;沈亮;陈翠雪 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;秦彦苏 |
| 地址： | 361000 *** | 国省代码： | 福建;35 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种重组大肠杆菌生产磷脂酶D的方法，将磷脂酶D基因置于严谨型启动子控制下，在表达质粒中插入pSC101的par区域，同时使用大肠杆菌recA突变株保持质粒的遗传稳定，生长期富集含质粒的细胞培养至高密度，诱导期饱和诱导，同时降低温度和施加碱金属盐胁迫，缓解PLD对宿主的细胞毒性，抑制细胞裂解，延长PLD的合成时间，从而提高PLD的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 大肠杆菌 生产 磷脂酶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种重组大肠杆菌生产磷脂酶D的方法，其特征在于：包括：1)以含有如SEQ ID No.1所示的pSC101的par区域序列的质粒pUC57‑par为模板，扩增par序列；以含有阿拉伯糖启动子PBAD的质粒pBADK为模板，扩增质粒pBADK骨架；以上述扩增得到的par序列和pBADK骨架分别作为引物和模板，扩增并转化，得到载体pBADKP；采用含有如SEQ ID No.2所示的密码子优化的Streptomyces antibioticus PLD基因序列的质粒pUC57‑PLD与所述载体pBADKP，通过Nco I和Xba I双酶切，连接并转化至大肠杆菌recA‑缺陷株，得到含有pBADKP‑PLD的重组菌；2)培养步骤1)得到的含有pBADKP‑PLD的重组菌，培养至高密度；然后补充营养，饱和诱导，调节温度为16～22℃，添加碱金属盐至浓度为0.05～0.75M，诱导表达得到磷脂酶D。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于厦门大学，未经厦门大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810843255.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
