[发明专利]鸭坦布苏病毒的qPCR检测方法在审
申请号: | 201810851970.0 | 申请日: | 2018-07-30 |
公开(公告)号: | CN108950071A | 公开(公告)日: | 2018-12-07 |
发明(设计)人: | 陈国强;时长军;李永旺;王凯民;张嵘;陈雷;朱婷;陆春华 | 申请(专利权)人: | 中华人民共和国苏州出入境检验检疫局;苏州西山生物技术有限公司;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
代理公司: | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人: | 马明渡;杨超 |
地址: | 215021 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 一种鸭坦布苏病毒的qPCR检测方法,其特征在于:包括以下步骤:针对鸭坦布苏病毒的E蛋白基因设计了一对引物,上游引物序列如SEQ NO:1所示,下游引物序列如SEQ NO:2所示;引物在DTMUV BYD‑1株的靶序列被人工连接到pUC57载体上,形成标准品重组质粒;分别以标准品重组质粒和待测样品中的核酸为模板,进行qPCR扩增反应;反应后采集荧光信号,得到qPCR产物的Ct值并进行熔解曲线分析,当Ct值≤36且Tm值在82.9~83.3之间时,样品中含有鸭坦布苏病毒,为阳性;建立标准曲线,得待测样品含量。本发明方法可以检测鸭坦布苏病毒分离株以及WF100活疫苗,灵敏性高,特异性好。 | ||
搜索关键词: | 病毒 待测样品 重组质粒 标准品 检测 熔解曲线分析 上游引物序列 下游引物序列 病毒分离株 标准曲线 基因设计 扩增反应 一对引物 荧光信号 靶序列 活疫苗 灵敏性 核酸 引物 采集 | ||
【主权项】:
1.一种鸭坦布苏病毒的引物对,其特征在于:其中一条引物DTMUV‑F为针对鸭坦布苏病毒的E蛋白基因设计的上游引物,该上游引物的序列为5’‑GGCAATGGCTGTGGCTTGTT‑3’;另一条引物DTMUV‑R为针对鸭坦布苏病毒的E蛋白基因设计的下游引物,该下游引物的序列为5’‑TTGTGGTAGGTGCTCGCTTCC‑3’ 。
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