[发明专利]一种谷氨酸棒杆菌代谢组的分析方法

摘要

本发明提供了一种谷氨酸棒杆菌代谢组的分析方法，包括：谷氨酸棒杆菌细胞收集及淬灭；胞内代谢物提取；代谢物衍生化；最后通过GC‑MS及多元统计对样品分析得到代谢组结果；所述谷氨酸棒杆菌代谢组的分析手段涉及代谢反应的终止、代谢物的提取、代谢物的鉴定与定量、统计学分析，从而获得谷氨酸棒杆菌发酵过程中不同阶段代谢物的定性和定量结果，为谷氨酸棒杆菌代谢组的分析提供了方法，这种方法对促进谷氨酸棒杆菌的代谢组学及代谢工程研究具有重要的意义。

主权项

1.一种谷氨酸棒杆菌代谢组的分析方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)胞内代谢物处理①细胞收集及淬灭取谷氨酸棒杆菌发酵液,4℃离心以除去培养基中大部分固体杂质，将细胞沉淀置于液氮中淬灭反应，液氮中保存待用；②代谢物提取将收集好的细胞置于液氮中研磨成粉末并放入离心管中，加入预冷的代谢物提取液,所述代谢物提取液为体积比为1:1的甲醇与水的混合溶液，震荡均匀后，置于液氮中1min后，取出后于室温融化，使细胞内代谢物逐渐被提取液溶出；离心取上清至离心管中加入氘标记的琥珀酸作为内标，混匀后预冻,再真空冷冻干燥；③衍生化处理及GC‑MS测定向真空冷冻后的细胞粉末中加入甲氧基氨盐酸盐的吡啶溶液并水浴进行肟化反应；反应结束后再加入MSTFA并水浴进行硅烷化反应；然后对溶液进行GC‑MS测定；(2)GC‑MS测定条件色谱柱：DB‑5毛细管色谱柱，J&W Science,USA进样口温度：250℃载气：高纯氦气(纯度＞99.999％)；流速1mL/min接口温度：280℃柱温箱温度梯度：70℃(2min)→5℃/min升至290℃→290℃(3min)离子源温度：230℃(3)代谢物鉴定与定量分析根据色谱图中保留时间及质谱图中特征离子确定化合物结构；然后将样品中各种代谢物峰面积进行积分；将各个代谢物峰面积与同个样品中的内标物峰面积利相比，得到各个代谢物的相对丰度；用SIMCA‑P软件对所有预处理后的数据进行多元统计分析，整体分析各个样品间的代谢差异。