[发明专利]一种枸杞炭疽病抗性评价方法

摘要

本发明公开了一种通过室内离体鉴定法评价枸杞炭疽病抗性的方法，该方法步骤如下：1)叶片采集，2)炭疽病菌培养，3)孢子悬液制备，4)炭疽病菌接种，5)枸杞离体叶片接种后病情调查及统计，6)根据分级标准将枸杞材料的炭疽病抗性进行分级。本发明形成完善的炭疽病抗性评价体系，本方法可操作性强、准确性高，能够科学地评价不同枸杞品种/株系对枸杞炭疽病抗性等级，对枸杞种植和分子育种具有较高的应用价值。

主权项

1.一种枸杞炭疽病抗性评价方法，其特征在于，包括如下步骤：1)叶片采集：采集生长部位相当、大小基本一致且无病虫的枸杞叶片；2)炭疽病菌培养：将保存的枸杞炭疽病菌株，在超净工作台接种于PDA固体平板，该PDA固体平板包括马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15克，并且加蒸馏水定容至1000毫升后高压蒸汽灭菌，于28±1℃培养；3)孢子悬液制备：将生长5‑7天的菌落划块接种于液体PDA培养基，该液体PDA培养基包括马铃薯200克，葡萄糖20克，并且加蒸馏水定容至1000毫升后高压蒸汽灭菌，震荡培养5‑7天，离心，计数，用灭菌蒸馏水稀释至所需浓度，具体为106个孢子/ml、107个孢子/ml、108个孢子/ml，得到孢子悬液，备用；4)炭疽病菌接种：将枸杞叶片进行表面消毒并清洗后，将叶片置于灭菌培养皿，用灭菌手术刀刀尖在叶片叶脉两侧划2mm伤口，伤口处分别接种10μL配置好的孢子悬液，并进行培养；5)枸杞离体叶片接种后病情调查及统计：于25℃、12h光照/12h黑暗、湿度80％条件培养4天后测量病斑直径，将直径大小作为衡量病害严重程度的评价指标；6)根据分级标准将枸杞材料的炭疽病抗性进行分级，分级标准如下：一级：病斑直径X：0≤X<1mm；二级：病斑直径X：1≤X<2mm；三级：病斑直径X：2≤X<3mm；四级：病斑直径X：3≤X<4mm。