[发明专利]一种人源化活性去细胞角膜基质支架的制备方法

摘要

本发明公开了一种人源化活性去细胞角膜基质支架的制备方法，包括将间充质干细胞接种到动物源性去细胞角膜基质载体材料上进行定向诱导培养，得到所述人源化活性去细胞角膜基质支架；具体操作步骤包括：步骤一、动物源性去细胞角膜基质载体材料的复水；步骤二、将体外分离培养的1代～4代间充质干细胞接种到步骤一中复水后的动物源性去细胞角膜基质载体材料，然后加入定向诱导培养液，于CO₂培养箱中进行定向诱导培养，得到人源化活性去细胞角膜基质支架。本发明的人源化活性去细胞角膜基质支架具有透明度高、韧性好、抗拉性能高和生物相容性好等特点，可以促进受损角膜干细胞的增殖分化，进而促进受损角膜的愈合。

主权项

1.一种人源化活性去细胞角膜基质支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、对动物源性去细胞角膜基质载体材料进行复水；步骤二、将体外分离培养的1代～4代间充质干细胞接种到步骤一中复水后的动物源性去细胞角膜基质载体材料上，然后加入定向诱导培养液，于CO₂培养箱中进行定向诱导培养，得到人源化活性去细胞角膜基质支架；步骤二中所述接种的方法为：将间充质干细胞制成细胞浓度为1×10³/μL～1×10⁶/μL的细胞悬液，采用间隔滴注法滴注到动物源性去细胞角膜基质载体材料的两面；所述间隔滴注法包括：取50μL所述细胞悬液滴注到动物源性去细胞角膜基质载体材料的一面，静置0.5h后再次滴注50μL细胞悬液，静置0.5h，然后翻转载体材料，在动物源性去细胞角膜基质载体材料的另一面滴注50μL细胞悬液，静置0.5h后再次滴注50μL细胞悬液，静置0.5h；所述间充质干细胞为人角膜基质间充质干细胞或人脐带间充质干细胞；所述定向诱导培养所用的定向诱导培养液为添加有2‑O‑α‑D‑吡喃葡萄糖基‑L‑抗坏血酸、三碘甲状腺素和蛋白添加物的EMEM培养液；所述定向诱导培养液中2‑O‑α‑D‑吡喃葡萄糖基‑L‑抗坏血酸的浓度为0.25mM～1mM，三碘甲状腺素的浓度为0.038nM～0.154nM；所述蛋白添加物为血清替代物、胎牛血清或人血小板裂解液，血清替代物的体积为定向诱导培养液体积的5％～10％，胎牛血清的体积为定向诱导培养液体积的0.5％～0.8％，人血小板裂解液的体积为定向诱导培养液体积的1％～4％。