[发明专利]一种使用脱钙法制作骨组织切片的方法

摘要

本发明提供一种使用脱钙法制作骨组织切片的方法，包括如下步骤：S1：取骨组织置于由PBS配制的多聚甲醛中固定；S2：取出骨组织，冲洗后置于PBS‑EDTA脱钙液中，直至骨组织初步变软；S3：切割成组织块，并放入盛有无机酸脱钙液的容器中，再置于水浴锅中脱钙；S4：将脱钙的组织块冲洗去酸后进行梯度脱水，转入盛有氯仿‑无水乙醇混合液的容器内，最后再转入盛有氯仿溶液的容器内；S5：取出组织块进行浸蜡处理，包埋，切成蜡片后置于蒸馏水中，烘干，染色后封片。本发明提供的两步法脱钙，其中PBS‑EDTA脱钙液有很强的结合钙离子的能力，并在温度34‑38℃条件下脱钙，有效缩短预脱钙时间；采用两种酸混合脱钙，既可促进脱钙完全又能加快脱钙速度。

主权项

1.一种使用脱钙法制作骨组织切片的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：固定：取骨组织，清除其他组织至表面光滑，置于由PBS配制的多聚甲醛中固定；S2：预脱钙：将骨组织从多聚甲醛中取出，冲洗后置于PBS‑EDTA脱钙液中，并放入温度为34~38℃的恒温箱中直至骨组织初步变软；S3：脱钙：将初步变软的骨组织切割成组织块，并放入盛有无机酸脱钙液的容器中，再将容器置于水浴锅中，在温度40~60℃下脱钙18~24h，直至组织块完全变软；S4：脱水与透明：对脱钙的组织块冲洗并去酸后进行梯度脱水，在脱水完成后转入盛有氯仿‑无水乙醇混合液的容器内8~12h，最后再转入盛有氯仿溶液的容器内24~48h，直至组织块下沉至容器底部即完成透明过程；S5：包埋与切片：步骤S4完成后，取出组织块进行浸蜡处理，并对组织块进行包埋直至凝固成蜡块，将蜡块切成蜡片，置于蒸馏水中展开，烘干直至蜡片与载玻片相贴合，最后染色后封片。