[发明专利]新型HIV-1耐药检测方法的建立及其应用

摘要

本发明公开了一种新型HIV‑1耐药检测方法的建立及其应用。本发明建立的新型HIV‑1耐药检测方法，优点在于：①利用多套引物组合，兼顾了不同亚型毒株序列差异所造成的目的基因扩增效率低下的问题；②在一个反应管中完成了PR、RT和IN靶标基因cDNA的合成与目的基因巢式PCR的第一轮扩增，避免了分别对目的基因进行扩增，简化了实验流程，将试剂成本节约一半。本发明建立的检测方法，可同时覆盖多个毒株亚型、同时涵盖多个基因区域，使得HIV‑1耐药检测效率大大提高，对于艾滋病防治和公共卫生具有重大影响。

主权项

1.引物组合，由引物组I、引物组Ⅱ和引物组Ⅲ组成；所述引物组I由引物DR1‑1‑CNB、引物DR2‑1‑CNBC、引物DR1‑2‑CNB、引物DR2‑2‑CNBC、引物pol‑1e、引物pol‑x、引物IN1、引物IN1‑07BC、引物IN2和引物IN2‑07BC组成；所述引物组Ⅱ由引物DR‑3、引物DR1‑4‑CNB和引物DR2‑4‑CNBC组成；所述引物组Ⅲ由引物IN3、引物IN3‑07BC、引物IN4和引物IN4‑07BC组成；所述引物DR1‑1‑CNB为如下(a1)或(a2)；(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物DR2‑1‑CNBC为如下(a3)或(a4)；(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述DR1‑2‑CNB为如下(a5)或(a6)；(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物DR2‑2‑CNBC为如下(a7)或(a8)；(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物pol‑1e为如下(a9)或(a10)；(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物pol‑x为如下(a11)或(a12)；(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；所述引物IN1为如下(a13)或(a14)；(a13)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(a14)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物IN1‑07BC为如下(a15)或(a16)；(a15)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(a16)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物IN2为如下(a17)或(a18)；(a17)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(a18)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物IN2‑07BC为如下(a19)或(a20)；(a19)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(a20)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物DR‑3为如下(a21)或(a22)；(a21)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(a22)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物DR1‑4‑CNB为如下(a23)或(a24)；(a23)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(a24)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物DR2‑4‑CNBC为如下(a25)或(a26)；(a25)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(a26)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物IN3为如下(a27)或(a28)；(a27)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(a28)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物IN3‑07BC为如下(a29)或(a30)；(a29)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(a30)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物IN4为如下(a31)或(a32)；(a31)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(a32)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子；所述引物IN4‑07BC为如下(a33)或(a34)；(a33)序列表的序列17所示的单链DNA分子；(a34)将序列17经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列17具有相同功能的DNA分子。