[发明专利]一种建立miR-32-5p基因敲除小鼠模型的方法及应用在审
| 申请号： | 201810884350.7 | 申请日： | 2018-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN108998474A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 刘江华;祖旭宇;钟小林;陈玲 | 申请（专利权）人： | 南华大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人： | 马强;周栋 |
| 地址： | 421000 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种建立miR‑32‑5p基因敲除小鼠模型的方法及应用。将miR‑32‑5p的三个sgRNA与Cas9核酸酶mRNA体外转录后，注射到受精卵中，获得miR‑32‑5p基因敲除小鼠。miR‑32‑5p敲除小鼠具有抗炎性疼痛、抗抑郁和抗血管钙化能力。本发明首次使用CRISPR/Cas9基因敲除技术，建立miR‑32‑5p敲除的小鼠动物模型，为研究miR‑32‑5p在神经系统及血管病变进程中的作用提供可靠、稳定的动物模型。 | ||
| 搜索关键词： | 基因敲除小鼠 动物模型 敲除小鼠 受精卵 基因敲除 神经系统 首次使用 体外转录 血管病变 血管钙化 核酸酶 抗炎性 抑郁 敲除 小鼠 应用 注射 疼痛 进程 研究 | ||
【主权项】：
1.一种建立miR‑32‑5p基因敲除小鼠模型的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：(1)确定miR‑32‑5p基因的特异性靶位点sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3；所述miR‑32‑5p的sgRNA1靶序列如SEQ ID NO.1所示，sgRNA2靶序列如SEQ ID NO.2所示，sgRNA3靶序列如SEQ ID NO.3所示；(2)将C57/BL6雌性小鼠促排卵和体外受精；(3)将步骤(1)所述的sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3与Cas9核酸酶mRNA体外转录后，显微注射到受精卵中，将受精卵移植到代孕母鼠子宫，繁育得到F0代小鼠，对其进行剪尾，提取DNA进行测序；(4)将F0代阳性小鼠与野生型小鼠交配繁育得到F1代杂合子小鼠；(5)将F1代杂合子小鼠杂交获得F2代纯合子小鼠，即为miR‑32‑5p基因敲除小鼠模型。
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