[发明专利]一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法

摘要

本发明提供了一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法。该培养基由大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、少量有机添加物、大量有机添加物、无机添加物、植物生长调节剂、植物活性提取液所组成。培养基的配制方法包括制备母液、制备植物活性提取液、配制混合培养液、配制培养基、调节pH、培养基分装与高压蒸汽灭菌、培养基内添加己酸二乙氨基乙醇酯等步骤。本发明所述的培养基具有高效率地诱导菘蓝花药愈伤组织、降低褐化的优点，可以大幅度地提高菘蓝花药培养效率，加快菘蓝花培育种进程。

主权项

1.一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法，其特征在于，诱导培养基的配方如下：大量元素：KNO3 2300~2500mg/L，NH4NO3 1400~1700mg/L，KH2PO4 550~600mg/L，MgSO4·7H2O 360~400mg/L，CaCl2·2H2O 410~460mg/L；微量元素：MnSO4·4H2O 20~25mg/L，ZnSO4·7H2O 7~9mg/L，H3BO3 11~14mg/L，KI 0.6~0.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.022~0.026mg/L，CoCl2·6H2O 0.022~0.026mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.20~0.30mg/L；铁盐及络合剂：FeSO4·7H2O 53~58mg/L，Na2‑EDTA 60~64mg/L；少量有机添加物：肌醇45~55mg/L，谷氨酰胺40~60 mg/L，脯氨酸14~17 mg/L，丝氨酸22~25mg/L，维生素B1 0.2~0.5mg/L，维生素B6 0.4~0.6mg/L，维生素C 6~8mg/L，烟酸0.45~0.65mg/L，核苷0.33~0.37mg/L；大量有机添加物：山梨醇5~7g/L，蔗糖15~20g/L，麦芽糖10~13g/L，植物凝胶2~4g/L；无机添加物：N‑甲基‑N‑亚硝基脲3.0~3.3 mg/L，硅藻土0.2~0.5g/L；植物生长调节剂：己酸二乙氨基乙醇酯 0.3~0.5mg/L，NAA 0.7~1.0mg/L，肉桂酸 0.2~0.4mg/L；植物活性提取液：胡萝卜提取液30~36mL/L，西瓜汁20~27mL/L；诱导培养基的配制方法包括如下步骤：（1）制备母液大量元素、微量元素、铁盐及络合剂母液分别制备成20、200、200倍的母液；少量有机添加物中肌醇单独制备成100倍母液，其它制备成200倍母液；己酸二乙氨基乙醇酯称量好后直接用蒸馏水定容，NAA和肉桂酸分别称量好后先用少量无水乙醇预溶，然后用热的蒸馏水定容，己酸二乙氨基乙醇酯、NAA和肉桂酸均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐及络合剂母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于0~4℃冷藏保存备用；（2）制备植物活性提取液胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后称取45g，带皮切成碎块，加入100ml蒸馏水，煮沸20min后捣碎，用4～6层纱布过滤静置，待沉淀后取上清液；西瓜汁的提取：将新鲜西瓜瓜瓤取出切成小块，放入榨汁机中榨成汁，稍静置后过滤至密封塑料瓶中，0~4℃冷藏保存备用；（3）配制混合培养液先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、肌醇、其他少量有机添加物、NAA和肉桂酸的母液、胡萝卜提取液和西瓜汁加入烧杯中，再将称量好的山梨醇、蔗糖、麦芽糖、N‑甲基‑N‑亚硝基脲、硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；（4）配制培养基用天平称取所需的植物凝胶，放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；（5）调节pH用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.6~6.0；（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至55℃取出，置于超净工作台中；（7）培养基内添加己酸二乙氨基乙醇酯按照40ml/瓶培养基的用量计算需加入的己酸二乙氨基乙醇酯母液用量，无菌操作下加入已灭菌的己酸二乙氨基乙醇酯母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。