[发明专利]一种基于TiO2

摘要

本发明公开一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电化学发光及对卵巢癌标记物的免疫传感方法，特点是基于锐钛矿TiO2介晶和Envision复合物，分别引入钌联吡啶及核/壳量子点作为能量供体/受体对。锐钛矿TiO2介晶不仅可以承载大量钌联吡啶，而且可以加速激发态钌联吡啶的产生从而促进核/壳状量子点的共振能量转移；富含辣根过氧化物酶的Envision复合物作为免疫传感平台可以承载大量信号探针，同时催化H2O2产生活性氧化物种，促进核/壳状量子点发光。ECL‑RET免疫传感器，具有灵敏度高、检测限低等优点，用于卵巢癌标记物，脂多糖刺激脂蛋白受体的检测，在早期卵巢癌诊断和监控方面具有较为重要的价值。

主权项

1.一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感方法，其特在于，包括以下步骤：（1） 玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）取50 μL 浓度为1.0×10‑2 M的钌联吡啶（Ru(bpy)32+）溶液与50 μL浓度为5 mg/mL锐钛矿TiO2介晶（CAMs）溶液混合，室温震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)32+@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL 浓度为100 ng/mL抗体（Ab），在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab‑Ru(bpy)32+@CAMs复合物；滴加3 μL上述所得Ab‑Ru(bpy)32+@CAMs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ab‑Ru(bpy)32+@CAMs修饰玻碳电极；（3）将步骤（2）制备的修饰电极置于浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；（4）取20 μL浓度比为4:1的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到50 μL 浓度为0.6 mg/mL核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的；然后将50 mL Envision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision‑CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL浓度为10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision‑CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用；（5）将步骤（4）制得的Envision‑CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液与不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液等体积混合后，取3 μL上述混合液于步骤（2）制备的修饰电极界面，并在37 ºC下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Envision‑CdZnSe/ZnSe QDs/LSR/Ab‑Ru(bpy)32+@CAMs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。