[发明专利]一种制备间充质干细胞外泌体的方法及其应用在审
| 申请号： | 201810910349.7 | 申请日： | 2018-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN109097326A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 朱建斌;江嘉豪;何美弟;陈炽峰;王进辉;于莉 | 申请（专利权）人： | 广东唯泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 许英伟 |
| 地址： | 528200 广东省佛山市南海*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种制备间充质干细胞外泌体的方法，包括：清洗人脐带组织表面血液，去除表皮和血管组织，取出华通胶清洗后剪碎，接种培养；传代培养；第二代脐带间充质干细胞接种培养；加入促进外泌体分泌的的细胞刺激因子；待细胞生长至90％融合度时吸出第一细胞上清液用于分离外泌体；将第一细胞上清液离心去除细胞碎片，收集第二细胞上清液；将第二细胞上清液进行第一次超滤浓缩，去除多余水分，得到第一浓缩液；将第一浓缩液进行第二次超滤浓缩，去除多余水分，得到第二浓缩液；将第二浓缩液进行第一次超速离心，取上清液进行第二次超速离心，去除上清液，沉淀为干细胞分泌的外泌体；加入生理盐水清洗，离心，去除上清液，得到外泌体沉淀。 | ||
| 搜索关键词： | 上清液 去除 浓缩液 细胞 间充质干细胞 超滤浓缩 超速离心 接种培养 制备 沉淀 清洗 脐带间充质干细胞 离心去除细胞 生理盐水清洗 细胞刺激因子 干细胞分泌 人脐带组织 传代培养 取上清液 细胞生长 血管组织 融合度 表皮 剪碎 吸出 分泌 取出 血液 应用 | ||
【主权项】：
1.一种制备间充质干细胞外泌体的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：清洗人脐带组织表面血液，去除表皮和血管组织，取出华通胶清洗后剪碎，采用组织贴壁法接种培养；步骤2：待原代细胞长至70％融合度时进行传代培养；选用生长状况良好的第二代脐带间充质干细胞接种培养；步骤3：在细胞培养过程中加入促进外泌体分泌的的细胞刺激因子，促进细胞生产和外泌体分泌；步骤4：待细胞生长至90％融合度时吸出第一细胞上清液用于分离外泌体；步骤5：将所述第一细胞上清液离心去除细胞碎片，收集第二细胞上清液；步骤6：将所述第二细胞上清液进行第一次超滤浓缩，去除多余水分，得到第一浓缩液；步骤7：将所述第一浓缩液进行第二次超滤浓缩，去除多余水分，得到第二浓缩液；步骤8：将所述第二浓缩液进行第一次超速离心，去除细小细胞碎片；步骤9：取上清液进行第二次超速离心，去除上清液，沉淀为干细胞分泌的外泌体；步骤10：加入生理盐水清洗，离心，去除上清液，得到外泌体沉淀。
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