[发明专利]海带配子体DNA溶液的制备方法及性别鉴定方法有效
| 申请号： | 201810915328.4 | 申请日： | 2018-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN108531478B | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 刘延岭;李言;姜黎明;彭捷;王利芹;赵聚萍;武瑞娜;李晓捷;潘金华;田萍萍 | 申请（专利权）人： | 山东东方海洋科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6879 |
| 代理公司： | 烟台双联专利事务所(普通合伙) 37225 | 代理人： | 梁翠荣 |
| 地址： | 264003 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种海带配子体DNA溶液的制备方法及性别鉴定方法，步骤为：海带配子体中加入灭菌的去离子水，充分研磨，经过沸水浴后室温静置，将上清液转移到灭菌离心管中，利用雌性特异引物HFM4和雄性特异引物Msj68‑16‑3进行一轮双引物PCR扩增，用于快速准确地鉴定多个品种或者品系海带配子体性别及混淆情况。本发明提供了一种简捷快速、不需要使用任何分子试剂制备海带配子体DNA溶液的方法并开发了一个海带雌配子体特异标记，针对性强，扩增效率高，稳定性好；结合实验室已开发的海带雄配子体特异标记，建立了一种利用海带配子体DNA溶液进行性别鉴定的方法，可以检测出海带配子体性别并确认是否发生雌雄混杂现象。 | ||
| 搜索关键词： | 海带配子体 性别鉴定 制备 灭菌 海带雌配子体 海带雄配子体 雄性特异引物 分子试剂 扩增效率 去离子水 室温静置 特异引物 研磨 沸水浴 离心管 上清液 双引物 混杂 品系 混淆 开发 检测 | ||
【主权项】：
1.一种海带配子体的性别鉴定方法，其特征在于：以海带配子体DNA溶液为PCR模板，利用雌性特异引物HFM4和雄性特异引物Msj68‑16‑3进行一轮双引物PCR扩增，用于多个海带品种或者品系配子体的性别鉴定及混杂现象确认；其中，雄性特异引物Msj68‑16‑3序列：上游引物 5’‑GTGGCCAGCCTACACTCACT‑ 3’下游引物 5’‑CCTTCTCGTAGCGTTCCTTG‑ 3’；雌性特异引物HFM4序列：上游引物 5’‑CATGCCGCGACATACTGATA‑ 3’下游引物 5’‑ACCCTTCAGGGGCTCAAGTA‑ 3’；其中，所述的海带配子体DNA溶液按照以下步骤制备：取鲜重质量1mg~30mg的海带配子体于1.5 mL灭菌离心管中，加入500μL灭菌的去离子水，充分研磨，沸水浴5~40分钟，室温静置沉淀20分钟以上，将上清液转移到灭菌离心管中。
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