[发明专利]一种改善记忆功能的核桃活性肽及其制备方法

摘要

一种改善记忆功能的核桃活性肽的制备方法，属于活性肽制备技术领域。以脱脂核桃粕为原料，经粉碎均质后，通过碱性蛋白酶和中性蛋白酶两步控制酶解技术充分水解，并采用膜分离技术，得到分子量﹥10kDa、10kDa～3kDa及﹤3kDa三个组分多肽。本发明所述技术，在两种酶共同作用下获得高水解度、高活性的核桃肽。分别以小鼠Morris水迷宫中空间探索试验和定位航行试验、避暗试验和跳台试验等行为学试验为指标，评价本发明物对实验动物改善记忆力的影响。结果显示，肽链较短的小肽(＜3kDa)对记忆障碍小鼠的空间认知及学习能力具有改善作用，并为食源性肽，具有安全性高，可长期服用。

主权项

1.一种改善记忆功能的核桃活性肽的制备方法，其步骤如下：(1)核桃脱脂蛋白粉制备取脱脂核桃粕50～250g，经多功能粉碎机粉碎30～90s后，与蒸馏水按照质量比1：5～10的比例混合，经胶体磨均质30～90s，静止3～8h，去掉部分上清液后，于3000～8000rpm离心10～20min；留沉淀，于‑50℃、＜30Pa条件下冷冻干燥20～30h，得到核桃脱脂蛋白粉；(2)核桃活性肽粗粉的制备将步骤(1)制备的核桃脱脂蛋白粉与蒸馏水配制成质量分数2％～7％溶液，在90～100℃条件下恒温水浴10～20min，冷却至40℃～60℃后，用1.0mol/L NaOH调节溶液pH至7.5～9.5，保持pH值恒定，加入碱性蛋白酶Alcalase 2.4L，加酶量为1000U/g～9000U/g，酶解0.5～5h后，溶液在90℃下灭酶10～20min；最后冷却至40℃～60℃，用1.0mol/L NaOH调节调节溶液pH至6.5～7.5；保持pH值恒定，加入中性蛋白酶Neutrase 0.8L，加酶量为1000U/g～11000U/g，酶解0.5～5h后，90℃灭酶10～20min；5000～8000rpm离心10～20min，上清液冷冻干燥后得到核桃活性肽粗粉；加入中性蛋白酶和加入碱性蛋白酶，加酶量均是按照核桃脱脂蛋白粉进行计算；(3)核桃活性肽粗提物的分离纯化将步骤(2)得到的核桃活性肽粗粉用蒸馏水配成浓度1～5mg/mL的溶液，利用超滤膜进行分离；将得到的溶液收集，旋转蒸发后‑20℃冷冻后，于‑50℃、＜30Pa条件下冷冻干燥20～30h，得到具有改善记忆功能的核桃活性肽。