[发明专利]一种基于PiggyBac载体的Her2-CAR-T系统构建方法在审
| 申请号： | 201810926458.8 | 申请日： | 2018-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN109097392A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 马晓冬;刘明;林展雯;李浔;黄行许 | 申请（专利权）人： | 马晓冬 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州专理知识产权代理事务所(普通合伙) 44493 | 代理人： | 谭昉 |
| 地址： | 510631 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及Her2‑CAR‑T系统构建技术，特别是涉及一种基于PiggyBac载体的Her2‑CAR‑T系统构建方法，其是通过设计合成Her2‑CAR基因片段，然后将Her2‑CAR基因片段连接到Piggybac载体上得到Piggybac‑CAR‑Her2，再将Piggybac‑CAR‑Her2转入大肠杆菌中进行扩增，然后从大肠杆菌中提取质粒，并加入到人血清中分离的淋巴细胞中进行扩展培养，采用Nucleofector细胞转染系统转染共转染质粒Piggybac‑CAR‑Her2和Piggybac Transposase到T淋巴细胞，得到带有Her2‑CAR基因片段的T淋巴细胞。本发明采用非病毒类载体PiggyBac系统，避免了使用病毒载体存在的安全隐患，具有更高的安全性和有效性，更加适用于临床治疗；采用的Nucleofector细胞核技术，能够将外源基因直接导入到细胞核，克服了脂质体转染和普通电穿孔，必须依赖细胞分裂时才有可能使外源基因入核表达的缺陷，细胞具有更高的存活率和增殖效率。 | ||
| 搜索关键词： | 系统构建 大肠杆菌 细胞核 外源基因 质粒 细胞分裂 淋巴细胞 非病毒类载体 脂质体转染 安全隐患 病毒载体 临床治疗 片段连接 设计合成 细胞转染 增殖效率 存活率 电穿孔 共转染 核表达 人血清 扩增 转染 转入 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种基于PiggyBac载体的Her2‑CAR‑T系统构建方法，其特征在于，其是通过设计合成Her2‑CAR基因片段，然后将Her2‑CAR基因片段连接到Piggybac载体上得到Piggybac‑CAR‑Her2，再将Piggybac‑CAR‑Her2转入大肠杆菌中进行扩增，然后从大肠杆菌中提取质粒，并加入到人血清中分离的淋巴细胞中进行扩展培养，采用Nucleofector细胞转染系统转染共转染质粒Piggybac‑CAR‑Her2和Piggybac Transposase到T淋巴细胞，得到带有Her2‑CAR基因片段的T淋巴细胞。
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