[发明专利]一种配合面部线雕的自体胶原蛋白组织填充物的制备方法

摘要

本发明涉及一种配合面部线雕的自体胶原蛋白组织填充物的制备方法，属于医学美容技术领域，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织；步骤二，传代培养；步骤三，胶原蛋白积累；步骤四，成纤维细胞与胶原蛋白的分离；步骤五，透明质酸凝胶制备；步骤六，自体胶原蛋白组织填充物的制备。该技术方案采用自体胶原蛋白组织填充物填充到皱纹底部，从而提高面部线雕环节蛋白质线和皮下细胞的附着效果，降低排异反应，并且透明质酸凝胶和自体胶原蛋白也为皮下细胞生长提供充足营养，在皮下细胞生长过程中作为粘附的骨架材料，在细胞生长成型后透明质酸凝胶和自体胶原蛋白也逐步降解，组织相容性好。

主权项

1.一种配合面部线雕的自体胶原蛋白组织填充物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织，用D‑Hanks缓冲液清洗，去除残留的血液和组织碎片，将自体成纤维组织剪成小块，加入消化液，放入37℃恒温震荡箱中消化20min～60min，然后静置待其分层后，吸取上层成纤维细胞液，移入含有胎牛血清的DMEM培养基中，密封离心分离，去除上清液，再次加入适量含有胎牛血清的DMEM培养基，吹打细胞制成成纤维细胞悬液，接种到培养瓶中，在37℃温度条件下，5％CO2恒温培养，定期更换培养基直到成纤维细胞铺满培养瓶底部；步骤二，传代培养，将步骤一得到的成纤维细胞从培养基中取出，加入D‑Hanks缓冲液清洗干净，然后加入酶液消化处理，在成纤维细胞长到80％～90％融合后传代培养；步骤三，胶原蛋白积累，在成纤维细胞生长三代后，将成纤维细胞放入无血清培养基，在37℃无血清培养基中培养，使成纤维细胞分泌出胶原蛋白；步骤四，成纤维细胞与胶原蛋白的分离，首先将步骤三中的无血清培养基取出，然后用50k超滤膜过滤，再用0.22μm的滤膜过滤，得到胶原蛋白液；步骤五，透明质酸凝胶制备，将透明质酸钠溶解于氢氧化钠溶液中，透明质酸钠在溶液中的质量浓度为3％～10％，搅拌至充分溶解，加入交联剂搅拌均匀，交联剂在溶液中的质量浓度为2％～5％，反应温度35℃～50℃，反应时间2h～10h，过滤除去盐酸溶液，加入D‑Hanks缓冲液，清洗24h～48h，得到透明质酸凝胶；步骤六，自体胶原蛋白组织填充物的制备，将步骤四得到的胶原蛋白液和步骤五得到透明质酸凝胶搅拌混合均匀，再加入林格氏液和葡萄糖液，得到自体胶原蛋白组织填充物。