[发明专利]一种从猪肺中分离提纯血管紧张素转化酶的方法在审
| 申请号： | 201810940099.1 | 申请日： | 2018-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN108977423A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 曹敏杰;肖盼盼;章骞;张凌晶;刘光明 | 申请（专利权）人： | 集美大学 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 赖秀华 |
| 地址： | 361000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及物质分离提纯领域，公开了一种从猪肺中分离提纯血管紧张素转化酶的方法，包括：(1)盐析：将猪肺溶于第一缓冲液中，组织均浆后加入促渗剂，搅拌、过滤、滤液离心，往所得上清液中加入盐至终浓度为0.2～0.5mol/L，混匀、离心，所得沉淀S1用含盐的第二缓冲液溶解，离心，所得沉淀S2用第三缓冲液溶解，离心，并将所得上清液用10kDa分子量截留的透析袋在第四缓冲液中进行透析以脱盐并去除分子量小于10kDa的杂蛋白，并用0.1wt％的硝酸银水溶液检测至透析液无沉淀即表示透析完成，得到透析母液；(2)阴离子吸附分离。本发明采用特定的盐析技术结合阴离子交换柱层析两步即可获得高纯度(银染级别的电泳纯)的血管紧张素转化酶，分离效果好，工艺简单，耗时短，极具工业应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 缓冲液 血管紧张素转化酶 透析 猪肺 沉淀 分离提纯 上清液 盐析 溶解 阴离子交换柱层析 硝酸银水溶液 分子量截留 阴离子吸附 分离效果 工业应用 技术结合 物质分离 促渗剂 电泳纯 高纯度 透析袋 透析液 杂蛋白 提纯 混匀 母液 去除 脱盐 银染 过滤 耗时 并用 检测 | ||
【主权项】：
1.一种从猪肺中分离提纯血管紧张素转化酶的方法，其特征在于，该方法包括：(1)盐析：将猪肺溶于第一缓冲液中，组织均浆后加入促渗剂，并在0～10℃下搅拌0.5～2h，过滤、滤液离心，往所得上清液中加入盐至终浓度为0.2～0.5mol/L，混匀、离心，所得沉淀S1用含盐的第二缓冲液溶解，离心，所得沉淀S2用第三缓冲液溶解，离心，并将所得上清液用10kDa分子量截留的透析袋在第四缓冲液中进行透析以脱盐并去除分子量小于10kDa的杂蛋白，并用0.1wt％的硝酸银水溶液检测至透析液无沉淀即表示透析完成，得到透析母液；所述第一缓冲液、第二缓冲液、第三缓冲液和第四缓冲液各自独立地为弱碱性缓冲液，所述促渗剂为能够促进猪肺组织中的蛋白渗透至第一缓冲液中的溶剂，加入上清液中的盐以及第二缓冲液中的盐各自独立地为金属氯化物；(2)吸附分离：将所述透析母液泵入填装有功能团为二乙胺基乙基的阴离子交换树脂的吸附柱中进行树脂吸附，吸附完成后采用解吸液进行淋洗解吸，所述解吸液为能够将血管紧张素转化酶从所述阴离子交换树脂上洗脱下来且不能够将杂质从所述阴离子交换树脂上洗脱下来的溶剂，收集洗脱液。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于集美大学，未经集美大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810940099.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
