[发明专利]一种基于双巯基核酸适配体检测可卡因的方法

摘要

本发明属于生物分子检测方法领域，具体涉及一种基于双巯基核酸适配体检测可卡因的方法。本发明检测可卡因的方法具体为：将DNA序列1溶液与DNA序列2溶液混合，水浴培养，得到双巯基核酸适配体1溶液；MoS2@AuNPs表面固定双巯基核酸适配体1；加入可卡因溶液，得到可卡因溶液1；加入核酸适配体2，得到可卡因溶液2；测定步骤可卡因溶液2的荧光强度，计算其荧光增长率，建立荧光增长率与可卡因浓度之间的线性回归方程；测定待测可卡因溶液的浓度。本发明采用MoS2@AuNPs‑双巯基核酸适配体1、核酸适配体2与可卡因形成一个类似于三明治的结构，可放大荧光信号，便于检测体系捕捉并检测，达到快速、准确、特异性检测待测物可卡因的效果。

主权项

1.一种基于双巯基核酸适配体检测可卡因的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备双巯基核酸适配体1：将DNA 1与DNA 2混合，得到DNA混合液，水浴反应后，再置于室温下培养，得到双巯基核酸适配体1溶液；（2）MoS2@AuNPs表面固定双巯基核酸适配体1：向PBS缓冲液中加入步骤（1）中所制备的双巯基核酸适配体1溶液与MoS2@AuNPs溶液，进行培养，得到含有MoS2@AuNPs‑双巯基核酸适配体1复合物的培养液，离心，向得到的沉淀物中加入PBS缓冲液，混匀后，得到MoS2@AuNPs‑双巯基核酸适配体1溶液；（3）结合可卡因：将步骤（2）得到的MoS2@AuNPs‑双巯基核酸适配体1溶液中，加入不同浓度梯度的可卡因溶液，培育，得到不同可卡因浓度的混合液1；（4）加入核酸适配体2：分别向步骤（3）的不同可卡因浓度的混合液1中，加入核酸适配体2，得到混合液2，培养，离心，向得到的沉淀物中加入PBS缓冲液，混匀，分别得到不同可卡因浓度的混合液3；（5）建立荧光增长率与可卡因浓度之间的线性回归方程：采集MoS2@AuNPs表面固定双巯基核酸适配体1后的背景荧光强度F0，分别测定步骤（4）的不同可卡因浓度的混合液3的荧光强度F，计算混合液3中各可卡因浓度的荧光增长率F/F0‑1；然后建立荧光增长率F/F0‑1与可卡因浓度x之间的线性回归方程y=ax+b，其中，y表示荧光增长率F/F0‑1，a、b为线性回归系数；（6）测定待测可卡因溶液的浓度：重复步骤（1）‑（2）的操作，制备MoS2@AuNPs‑双巯基核酸适配体1溶液，加入待测可卡因溶液、核酸适配体2，培养，离心，向得到的沉淀物中加入PBS缓冲液，混匀，得到待测混合液，测定待测混合液的荧光强度F待测，并采集MoS2@AuNPs表面固定双巯基核酸适配体1后的背景荧光强度F0，计算待测混合液的荧光增长率F待测/F0‑1，根据建立的线性回归方程，计算出待测可卡因溶液的浓度；所述DNA 1的核苷酸序列为：5’‑SH‑CCATAGGGAGACAAGGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC‑3’；所述DNA 2的核苷酸序列为：3’‑SH‑GGTATCCCT‑5’；所述核酸适配体2的核苷酸序列为：5’‑CCATAGGGAGACAAGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC‑FAM‑3’。