[发明专利]一种食品中副溶血性弧菌的快速检测和估数方法

摘要

本发明提供了一种检测结果准确、检测效率高的副溶血性弧菌检测方法。采用了专门的增菌剂，通过对样品进行预增菌、热处理、增菌、热处理、冷处理等操作，采用了专门的显色培养基，提高了副溶血性弧菌显色效果，从而提高了检测结果的准确度，大大提高了样品中副溶血性弧菌的被测出率。并且在检测副溶血性弧菌的同时，还能对其进行估数，初步确定食品中副溶血性弧菌的数量级。

主权项

1.一种食品中副溶血性弧菌的快速检测和估数方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、配置牛肉膏蛋白胨培养基：取新鲜牛心200g，用刀剁成肉末后，加入500ml蒸馏水、1g牛肉膏、5g蛋白胨、2g氯化钠、5g琼脂，用10％盐酸调整PH到7.8；并于121℃灭菌30min，冷却至常温；然后，对培养基和培养室紫外灭菌20min，关灯90min后使用。(2)、预增菌处理：称量待测样品10g至含牛肉膏蛋白胨培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，300rpm下振荡15min，于39℃培养24h。(3)、第一次热处理：将培养过的样品混合物倒入已灭菌的培养皿中，液面高度为1cm，先40±1℃培养0.5h，然后50±1℃培养1h；(4)、配置增菌剂、增菌：增菌剂配方为：按重量份计，1.5％酵母粉、3％氯化钠、1％亚碲酸钠、0.5％磷酸氢二钾、1.5％氢氧化钾、0.5％乙酰胆碱，其余为蒸馏水；增菌剂pH为9.5左右，使用前需121℃灭菌30min；将经过第一次热处理的样品混合物加入到生理盐水中，制成样品质量浓度为10％的样品匀液；按1∶100的质量比将增菌剂溶于蒸馏水中，得增菌液；将样品匀液与增菌液按1∶3.5的体积比混匀，37℃震荡培养7h，得样品增菌液；(5)、第二次热处理：将样品增菌液倒入已灭菌的培养皿中，液面高度为1cm，先30℃培养0.5h，然后35℃培养0.5h，40℃培养0.5h，45℃培养1h，50℃培养1h；(6)、冷处理：将第二次热处理后的样品增菌液直接放入4℃冰箱，冷却2h后取出，缓慢升至室温备用。(7)、配置显色培养基：显色培养基各组分的重量份为：胰蛋白胨10份，肝浸粉5份，酵母提取物2份，葡萄糖1份，硫代硫酸钠0.3份，环丝氨酸0.5份，5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑丁酸盐0.1份，5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑β‑D‑吡喃半乳糖苷0.05份，磷酸酯二钠盐0.025～0.05份，过氧化月桂酰0.01份，乙酰胆碱0.02份，乙酸乙酯0.015份，去离子水100‑500份，最终pH为8.0～8.2。(8)、建立副溶血性弧菌显色时间表：取步骤(7)中的显色培养基，加入副溶血性弧菌，配制成副溶血性弧菌浓度梯度范围为104‑108CFU/mL的显色反应液，密封后培养并进行显色反应，副溶血性弧菌置于上述显色培养基中显示红色，根据不同浓度的副溶血性弧菌显色反应液完全显色为红色的显示时间，建立显色时间表。(9)、副溶血性弧菌的培养显色：取步骤(6)中冷处理后备用的样品，置于步骤(7)的快速显色培养基中进行培养并进行显色反应；在显色反应过程中观察样品，其中样品颜色转变为红色的是阳性样品，样品颜色不变的是阴性样品；记录阳性样品完全变为红色的时间，根据步骤(8)的显色时间表，初步确定副溶血性弧菌的数量级。