[发明专利]一种快速简便的基因合成方法在审
| 申请号： | 201810956785.8 | 申请日： | 2018-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN109371007A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵 | 申请（专利权）人： | 通用生物系统（安徽）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 239000 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速简便的基因合成方法，包括如下步骤：将待合成基因序列分成若干正向寡核苷酸链和相对应的反向互补寡核苷酸链，相邻两条反向互补链之间相互错开4‑8nt，其余部分完全反向互补；合成正反寡核苷酸链；使用限制性内切酶酶切或PCR扩增线性化载体；正向寡核苷酸链和反向互补寡核苷酸链分别混合，退火，得到含有多个缺刻的双链DNA片段；将缺刻的双链DNA片段与线性化载体混合，利用T4连接酶将多个双链DNA片段与目标载体连接成环；将步骤五中连接产物转移至感受态细胞，菌检，测序验证。本发明无需经过PCR及胶回收纯化的过程，大大减少了因步骤繁多带来的人为错误和交叉污染，节约了时间和成本。 | ||
| 搜索关键词： | 寡核苷酸链 双链DNA片段 反向互补 线性化载体 基因合成 正向 退火 合成基因序列 限制性内切酶 反向互补链 感受态细胞 交叉污染 连接产物 目标载体 胶回收 错开 测序 成环 酶切 合成 验证 节约 | ||
【主权项】：
1.一种快速简便的基因合成方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一 将待合成基因序列分成若干正向寡核苷酸链和相对应的反向互补寡核苷酸链，相邻两条反向互补链之间相互错开4‑8nt，其余部分完全反向互补；步骤二 合成步骤一中正反寡核苷酸链；步骤三 使用限制性内切酶酶切或PCR扩增线性化载体；步骤四 将步骤三中正向寡核苷酸链和反向互补寡核苷酸链分别混合，退火，得到含有多个缺刻的双链DNA片段；步骤五 将步骤四得到的缺刻的双链DNA片段与步骤三得到的线性化载体混合，利用T4连接酶将多个双链DNA片段与目标载体连接成环；步骤六 将步骤五中连接产物转移至感受态细胞，菌检，测序验证。
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