[发明专利]一种水生植物金银莲花的组培快繁方法和应用

摘要

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种金银莲花组培快繁方法和应用，本发明所述方法由脱毒母本的获得、丛生芽的扩增、生根与完整植株的诱导、壮苗与移栽步骤构成。本发明针对室内人工条件下金银莲花的大规模繁殖，不受自然环境因素的限制，通过多重去污消毒手段获得无菌母本，通过MS、蔗糖和激素含量的调整，实现了丛生芽的高效扩繁和发达根系的诱导。采用该技术成本低，见效快，能够在短时间内批量生产规格一致、健壮、脱毒的金银莲花优质组培苗。所得种苗可应用于室内水族观赏布景、室外湿地公园建设及大型湿地生态修复工程等，可有效缓解当前我国金银莲花种苗市场稀缺问题。

主权项

1.一种金银莲花优质种苗的组培快繁方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)脱毒母本的获得从野外自然湿地中采集金银莲花植株少量，剪取带有分蘖芽的茎段，于洗涤液中浸洗0.5～2h后，用自来水冲洗干净,在超净工作室中，用70％～75％乙醇浸泡10～60s后，改用一定浓度的NaClO、H2O2或HgCl2消毒液浸泡消毒2～30min，再用无菌水彻底漂洗干净,将材料进一步切割整理后接种于装有已灭菌培养液①的三角瓶中，并以透气封口膜封口，置于专用组培架上培养,维持平均光照强度1000～5000lx，每日光照8～12h，室内温度20～30℃,一个月后挑出有新芽冒出且无细菌生长的材料,即金银莲花脱毒母本,所述培养液①为：1/4～1倍的MS+10～20g/L的蔗糖+0.5～3.0mg/L的细胞分裂素KT或6‑BA+0.1～1.5mg/L的生长素IAA或IBA,调pH至5.6～6.2之间；(2)丛生芽的扩增取上述步骤(1)所得金银莲花脱毒母本，于无菌操作台上转接入已灭菌的培养液②中，将三角瓶放回原组培架上培养30d左右，待瓶中金银莲花丛生芽足够多时取出，每3～5芽切割分瓶，并继续扩繁，直至总芽数达到所需数量，所述培养液②为：1/2～1倍的MS+15～40g/L的蔗糖+0.5～3.0mg/L的细胞分裂素KT或6‑BA+0.1～1.5mg/L的生长素IAA或IBA,调pH至5.6～6.2之间；(3)生根与完整植株的诱导取上述步骤(2)所得金银莲花丛芽，于无菌操作台上以每1～2个芽切割分离，转接入已灭菌的培养液③中，将三角瓶放回原组培架上培养15～30d，等待瓶中金银莲花生根并形成完整幼苗，所述培养液③为：1/4～1倍的MS+7.5～30g/L的蔗糖+0.01～0.5mg/L的生长素NAA或IBA,调pH至5.6～6.2之间；(4)壮苗与移栽将上述步骤(3)所得金银莲花幼苗从三角瓶中取出，若准备应用于室内水族缸中，则根据水族缸栽培的无菌要求，先以无菌水、去离子水或自来水冲洗以去除材料表面残余培养液，然后在无菌或有菌条件下将组培苗投入水族缸中即可，若准备应用于湿地公园建设或湿地生态恢复室外大型工程，则将组培苗先过自来水冲洗，清除MS和激素残余，后转入含稀释Hoagland营养液的开放水培箱中，并置于温室或室外壮苗2～4周，初期若遇室外光照过强，可用遮阳网挡去1/2太阳光，3～7d后组培苗能完全适应自然光，金银莲花组培苗的大规模移栽采用两种方式，其一为直接抛撒入自然水体使其漂浮生长，初期以围栏圈围防止其漂走，其二为先栽入以塘泥、泥炭土为主要成分的基质中，然后再移入浅水水体，这样定植更快，但初栽时水位深度不宜超过1m。