[发明专利]一种固定化右旋糖酐酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化右旋糖酐酶的制备方法，其制备方法为：将淡紫拟青霉菌接种到发酵培养基活化后进行液体发酵；发酵液经离心、(NH4)2SO4沉淀、超滤得到右旋糖酐酶酶液；将制备的磁性载体用戊二醛活化，与得到的右旋糖酐酶酶液，得到固定化右旋糖酐酶；固定化右旋糖酐酶加入到含右旋糖酐的醋酸盐缓冲液，裂解大分子右旋糖酐。反应液通过磁分离回收固定化酶，可重复使用20次。本发明制备以磁性颗粒为载体，制备的固定化右旋糖酐酶具有较高的热稳定性，反应；固定化右旋糖酐酶可以通过磁分离实现与酶催化产物的快速分离，可以重复使用。上述特点有利于该酶在制糖工业的用途，为工业生产节约了成本。

主权项

1.一种固定化右旋糖酐酶的制备方法，其特征在于：包括以下制备步骤：(1)将淡紫拟青霉菌接种到发酵培养基活化后进行液体发酵，液体发酵条件为28～30℃、200r/min培养6～9d；(2)发酵液离心后去除沉淀，上清液用(NH4)2SO4进行沉淀。收集硫酸铵饱和度0～80％的沉淀，用0.1mol L‑1，pH 5.5缓冲液溶解，溶解物10kDa超滤离心管，超滤30分钟后即得右旋糖酐酶酶液；(3)将固定化酶磁性载体Fe3O4·PDA·GO‑PEI用戊二醛活化，与步骤2得到的右旋糖酐酶液反应，得到固定化右旋糖酐酶Fe3O4·PDA·GO‑PEI‑dextranase；(4)固定化右旋糖酐酶加入到含右旋糖酐T70(20g L‑1)的醋酸盐缓冲液中，醋酸盐缓冲液的浓度为0.1mol L‑1，醋酸盐缓冲液的pH 5.5，50℃下反应，裂解大分子右旋糖酐。反应液中磁分离回收固定化酶，重复使用20次。