[发明专利]利用CRISPR/Cas9技术构建的亨廷顿病原位敲入小鼠模型及构建方法有效

专利信息
申请号: 201811006750.4 申请日: 2018-08-30
公开(公告)号: CN109112162B 公开(公告)日: 2021-10-15
发明(设计)人: 付彬;徐兴然;彭怡;王柏彬;杨丹;吴慧;杨春丽 申请(专利权)人: 西南大学
主分类号: C12N15/90 分类号: C12N15/90;A01K67/027
代理公司: 成都九鼎天元知识产权代理有限公司 51214 代理人: 邓亚君
地址: 400715*** 国省代码: 重庆;50
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摘要: 发明公开了一种利用CRISPR/Cas9技术构建的亨廷顿病原位敲入小鼠模型及构建方法,涉及生物技术领域。该方法其包括:设计gRNA靶点序列对,检测其体外Cas9酶切活性,挑选体外活性合格的gRNA靶点序列对备用;合成Donor DNA;将Cas9 mRNA、Donor DNA以及体外活性合格的gRNA靶点序列对混合均匀,对供体小鼠进行胚胎显微注射,再将胚胎移植到受体小鼠中备孕,繁殖子代即得。本发明不改变小鼠HD基因的表达调控,仅改变其特定致病基因的长度,利用CRISPR/Cas9技术成功构建HD原位敲入小鼠模型,为进一步模拟人类HD缓慢且迟发的发病过程及后续临床治疗研究提供一种新途径。
搜索关键词: 利用 crispr cas9 技术 构建 亨廷顿病 原位 小鼠 模型 方法
【主权项】:
1.利用CRISPR/Cas9技术构建亨廷顿病原位敲入小鼠模型的方法,其特征在于,其包括如下步骤:(1)设计gRNA靶点序列对,并检测其体外Cas9酶切活性,挑选出体外活性合格的gRNA靶点序列对备用;(2) 利用全基因合成Donor DNA;(3)将Cas9 mRNA 、Donor DNA以及体外活性合格的gRNA靶点序列对混合均匀,对供体小鼠进行胚胎显微注射,再将胚胎移植到受体小鼠中备孕,繁殖子代即得。
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