[发明专利]一种极度濒危植物贵州大花杜鹃的组培繁殖及离体保存方法

摘要

本发明公开了一种极度濒危植物贵州大花杜鹃的组培繁殖及离体保存方法，该方法适用于杜鹃花科贵州大花杜鹃的组培快繁及离体保存，属植物生物技术领域。本发明以开花过后的新抽稍的嫩茎段为外植体，通过外植体消毒、丛生芽诱导、壮苗、离体保存、生根一系列步骤，有效解决了因贵州大花杜鹃分布区域窄、引种驯化难造成的植株量少，毗邻濒危的现状，达到物种保护的目的。本发明提供的组培快繁方法，在1个月内增殖系数为8‑10，生根率为95%，移栽成活率为95%‑98%，极大地提高了贵州大花杜鹃的繁殖系数，离体保存可达240d以上，为该物种的引种驯化、离体保存、种苗扩繁回归种植提供了技术支撑。

主权项

1.一种极度濒危植物贵州大花杜鹃的组培繁殖及离体保存方法，其特征在于：1）外植体选择：取贵州大花杜鹃的新嫩茎段，用自来水冲洗12h后备用；2）外植体灭菌：取备好的外植体在无菌超净台上，用75%的酒精消毒30s，用无菌水冲洗3‑5遍，用0.1%氯化汞消毒8‑9min，使用无菌水冲洗3‑5遍；3）丛生芽诱导：丛芽诱导培养基为改良WPM +2.5mg/L 2‑iP（2‑异戊烯腺嘌呤）+0.8mg/L IBA，蔗糖28g/L，琼脂7g/L，pH5.6；改良WPM培养基为硝酸铵提高至为700mg/L，其他元素用量保持不变，将经过外植体灭菌过程后得到的茎段，在超净台上，用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌刀切割茎段，每段带一个潜伏芽，接种至丛生芽诱导培养基内，暗培养5天后进行光照培养30天以上, 培养35‑50天，光暗时间为12h/12h，光照强度为1500‑2000LUX；4）壮苗培养：壮苗培养基为改良WPM +0.5mg/L 2‑iP +0.1mg/L IBA，蔗糖28g/L，琼脂7g/L，pH5.6；将诱导出的新芽，接种至壮苗培养基内，将瓶苗处于光暗时间为12h/12h，光照强度为1500‑2000LUX；5）离体保存：离体保存培养基为改良WPM +0.5mg/L IBA+6mg/L CCC，pH5.6，蔗糖28g/L，琼脂6‑7g/L，温度为13‑18℃，光强度为1500LUX‑1600LUX，光暗时间为10h/14h；恢复生长分化培养基为改良WPM+1mg/L 6‑BA+0.05mg/L IAA，光暗时间为12h/12h，光照强度为1500‑2000LUX；6）生根培养：将生长至1.5cm~2cm高的芽苗转接至培养基为改良WPM +1mg/L IBA的培养基中，附加蔗糖28g/L，琼脂7g/L，pH5.6；光强度为2000LUX‑2500 LUX，光暗时间为12h/12h。