[发明专利]一种利用核酸适配体与PDDA组装纳米粒子检测牛奶中环丙氨嗪的方法

摘要

本发明公开了一种利用核酸适配体与PDDA组装纳米粒子检测牛奶中环丙氨嗪的方法。本发明利用核酸适配体修饰纳米金粒子，然后通过肉眼及紫外分光光度计检测牛奶中环丙氨嗪。本发明的适配体在体系中没有环丙氨嗪时包裹纳米金粒子并且结合PDDA，加入环丙氨嗪后竞争结合体系中的适配体，从而使纳米金失去保护，导致体系颜色从宝石红变成紫色甚至蓝色，体系在650nm及530nm处的吸光值发生显著变化，A650/A530值的变化与环丙氨嗪浓度在一定范围内呈线性关系，因而可用于牛奶中环丙氨嗪的检测。本发明提供的检测方法灵敏度高选择性好，最低检测限9.8ppb，操作简便不需要大型仪器，可用于牛奶中的环丙氨嗪的检测。

主权项

1.一种利用核酸适配体与PDDA组装纳米粒子检测牛奶中环丙氨嗪的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)检测液的制备：将10～30μL浓度为1×104～2×104nM的核酸适配体溶液和2.0～4.0mL浓度为50～60μg/mL的纳米金溶液混合后水浴下反应20‑40分钟，再添加2～4mL浓度为0.8～1.2nM聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA溶液，得到检测液；其中：核酸适配体的序列Tcy2如下：GGTTGGTTGGTTGGTTTT；(2)取若干支装有根据步骤(1)所述的检测液的离心管，分别加入不同浓度的环丙氨嗪标准液，使得不同离心管的检测体系中的环丙氨嗪含量分散分布在0.1‑1ppm之间，反应10～30min；(3)记录包括不同浓度环丙氨嗪标准液的检测体系的颜色变化后，用紫外分光光度计分别测定其在650nm和530nm处的吸光值，650nm和530nm处吸光值分别为A650和A530，计算ΔA＝A650/A530，以不同浓度环丙氨嗪与不同波长的峰值比值ΔA作图，绘制标准曲线；(4)对待测牛奶样品进行前处理后，与步骤(2)中的具有相同组分、组成的检测液混合，充分混匀后反应10～30min，按步骤(3)，用紫外分光光度计分别测定其在650nm和530nm处的吸光值，计算获得其ΔA；(5)根据步骤(4)所得的ΔA，查步骤(3)的标准曲线，求得样品中环丙氨嗪含量。