[发明专利]GelMA水凝胶人脱细胞羊膜三维双层辅料的制备方法

摘要

本发明涉及医用生物敷料领域，具体地说，是一种GelMA水凝胶人脱细胞羊膜三维双层辅料的制备方法，该方法是一种静电纺丝联合光交联技术制备GelMA水凝胶/人脱细胞羊膜三维双层敷料的方法，具体的制作方法为：明胶通过甲基丙烯酸酐（MA）接枝改性形成甲基丙烯酰胺基明胶（GelMA），将形成的GelMA通过静电纺丝技术，呈多孔纤维状覆盖在人脱细胞羊膜上（D‑HAM），制备成三维双侧生物活性敷料，将该敷料加入光引发剂Irgacure2959行光交联；将光交联后的该敷料冻干，于γ辐照灭菌，于无菌条件下封装。本发明具有良好的抗炎、抗感染及生物相容性，能够促进口腔黏膜创口快速愈合。

主权项

1.一种GelMA水凝胶人脱细胞羊膜三维双层辅料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：脱细胞羊膜（D‑HAM）的制备：选择肝炎病毒抗原、梅毒抗体及人免疫缺陷病毒抗体均为阴性的剖腹产的产妇，无菌操作下取胎膜，钝性分离去除绒毛膜组织，保留羊膜层，将羊膜转移到补充有抗生素及抗菌剂的无菌PBS中反复冲洗去除血凝块，然后用0.2% EDTA在37℃下处理30分钟，接着于0.5mol/L氢氧化钠溶液中浸泡30秒，此后将其转移到5%氯化铵中剧烈摇晃，通过剧烈晃动和刮擦从羊膜中去除细胞，最后用PBS洗涤三次，冻干后备用；步骤二：GelMA水凝胶电纺液的制备：将20g明胶与200mlPBS混合放入预热的60℃水浴中搅拌溶解至透明黄色液体，用泵将16ml甲基丙烯酸酐以4ml/min的速度在避光条件下滴入上述液体并充分搅拌2小时，加入预热好的800mlPBS搅拌反应15min注入14‑16KD透析袋中用去离子水透析一周，一周后将取出透析袋中溶液，选用0.45um滤纸过滤后放入‑20℃冰箱预冻12小时，之后冻干备用；步骤三：三维双层敷料的制备：取100mg‑120mg加1ml六氟异丙醇配成电纺液，将步骤二中冻干后的脱细胞羊膜固定于滚筒上进行静电纺丝操作，将纺成的D‑HAM/E‑GelMA用70%乙醇处理1小时，之后将该敷料加入光引发剂Irgacure2959行光交联，将光交联后的该敷料用PBS清洗除去光引发剂后冻干，于γ辐照灭菌，于无菌条件下封装，4℃保存即得GelMA水凝胶人脱细胞羊膜三维双层辅料。