[发明专利]一种基于微量法的辅酶A含量测定试剂盒及其方法

摘要

本发明公开了一种基于微量法的辅酶A含量测定试剂盒及其方法，该试剂盒的组分包括由Tris‑HCl、巯基乙醇、PMSF和甘油组成的试剂一，由Tris‑HCl和水组成的试剂二，由MgCl₂、酮戊二酸、鱼藤酮和TPP组成的试剂三，由NAD组成的试剂四，由α‑酮戊二酸脱氢酶组成的试剂五。该方法的原理为α‑酮戊二酸脱氢酶可催化辅酶A、α‑酮戊二酸和NAD⁺生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，在反应体系中加入α‑KGDH、α‑酮戊二酸和NAD⁺，辅酶A含量和NADH的生成速率成正比。本发明具有适用范围广泛，检测灵敏度高，检测时间短，试剂用量少，成本极低的优点。

主权项

1.一种基于微量法的辅酶A含量测定试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：试剂一，液体100mL×1瓶，由Tris‑HCl缓冲溶液、巯基乙醇、PMSF和甘油组成，置于100mL容量瓶中， 4℃保存；试剂二，液体20mL×1瓶，由Tris‑HCl缓冲溶液和水组成，置于20mL容量瓶中，4℃保存；试剂三，粉剂×1瓶，由MgCl2、α‑酮戊二酸、鱼藤酮和TPP组成，置于1.5mL EP管中，‑20℃保存；试剂四，粉剂×1支，由NAD组成，置于1.5mL EP管中，‑20℃保存；试剂五，粉剂×1支，由α‑酮戊二酸脱氢酶组成，置于1.5mL EP管中，‑20℃保存。