[发明专利]人原代肝癌组织的体外模型的建立方法

摘要

本发明涉及一种人原代肝癌组织的体外模型研究的技术领域，尤指人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，主要包括：1）收集新鲜肝癌组织标本；2）将肝癌组织置于培养液中；3）低温运输并准备进一步处理；4）将取得的肝癌组织切成米粒大小；5）所述肝癌组织经含抗生素的PBS清洗，然后置于48孔板中；6）所述肝癌组织经冰冻包埋切片，进行原位末端标记法，检测组织凋亡情况；7）切片均在显微镜下取三个视野；8）统计各组平均光密度；9）进行统计分析；本发明利用人原代肝癌组织进行体外培养，建立了一种抗凋亡、去分化的模型，进行体外的无血清培养，无需消化、传代，制备程序比较方便快捷，保留原发肿瘤的异质性和空间结构；更能减少组织凋亡。

主权项

1.人原代肝癌组织的体外模型的建立方法，其特征在于，所述的建立方法主要包括以下步骤：1）收集经手术切除的新鲜肝癌组织标本；2）将所述肝癌组织暂时置于预冷的含抗生素的培养液中储存；3）然后于2h内完成低温运输并准备进一步处理；4）在无菌操作台内，将从步骤2）的培养液中取得的肝癌组织切成米粒大小；5）所述肝癌组织经含抗生素的PBS清洗，然后置于48孔板内；随后在48孔板中加入培养基，再添加调节激酶抑制剂PD98059；6）所述肝癌组织经冰冻包埋切片，进行原位末端标记法，通过免疫荧光染色检测组织凋亡情况；7）每张切片均在荧光显微镜下取三个视野；8）通过Image J软件统计各组平均光密度；9）通过GraphPad Prism软件进行统计分析。