[发明专利]一种羧肽酶B分泌表达的方法在审
| 申请号： | 201811044790.8 | 申请日： | 2018-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN109136208A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 张梁;於瑞梅;辛瑜;顾正华;李由然;丁重阳;石贵阳 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/62;C12N15/70 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 何金锦 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种羧肽酶B分泌表达的方法，所述方法包括如下步骤：(1)以信号肽OmpA、PelB、Endoxylanase和OmpT序列为出发序列，分别进行定点突变；(2)制备核苷酸序列SDB‑pCPB‑6×His；(3)制备重组表达载体；(4)将重组表达载体转化至宿主大肠杆菌E.coli BL21并诱导表达pCPB；(5)酶切上述pCPB并纯化CPB。本发明通过对信号肽的改造，能够将羧肽酶原B直接分泌到培养基中，相比于胞内和周质表达，不需要破碎细胞，回收与纯化更能容易操作。另外，培养基中空间足够大，利于重组蛋白的过量表达。 | ||
| 搜索关键词： | 重组表达载体 分泌表达 培养基 羧肽酶B 制备 大肠杆菌 宿主 核苷酸序列 信号肽OmpA 羧肽酶原B 定点突变 过量表达 破碎细胞 诱导表达 重组蛋白 周质表达 信号肽 中空间 酶切 分泌 回收 转化 改造 | ||
【主权项】：
1.一种羧肽酶B分泌表达的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)以信号肽OmpA、PelB、Endoxylanase和OmpT序列为出发序列，分别进行定点突变；(2)在编码羧肽酶原B的基因序列的N端添加信号肽突变序列，在编码羧肽酶原B的基因序列的C端添加编码组氨酸标签的密码子，得到核苷酸序列SDB‑pCPB‑6×His；(3)将步骤(2)确定的核苷酸序列SDB‑pCPB‑6×His克隆到载体PTIG‑TRX，获得重组表达载体；(4)将重组表达载体转化至宿主大肠杆菌E.coli BL21并诱导表达pCPB；(5)酶切上述pCPB并纯化CPB。
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